A vizeletürítés és a nyál a tuberkulózis számára

A tuberkulózis különböző analíziseinek sokféleségét nem a betegség könnyű diagnosztizálása, hanem az elhanyagoltsága magyarázza. Az emberek ősidők óta próbált találni a módját, hogy azonosítsa phthisis a korai szakaszában jár, ezért különböző tanulmányokat végeztek a betegek, amelyek közül néhány valóban gyökeret vert, mint a diagnosztikai módszerek betegség vagy eszközeként kíséri a folyamatot a betegség.

Mi a vizelet és a nyál teszt?

A nyál és a vizelet tuberkulózisának Bac analízisét arra késztették, hogy észleljék a hatóanyag jelenlétét a szervezetben. Azonban ezeknek a vizsgálatoknak az a célja, hogy megerõsítsék a betegséget a meglévõ tünetekkel, nem pedig megtalálják azt, mivel az elsõdleges megelõzõ diagnózisra számos más megbízható módszer létezik.

Ezen túlmenően, a vizelet vagy a köpet és a nyál elemzést a TB orvosok elvégezheti azonosítani az átmenet a zárt formában a betegség a nyitott, amelyet az jellemez, a megjelenése nagy mennyiségű bacillusok természetes folyadékok és széklet a beteg, és így nagyon járványtanilag veszélyes másoknak.

Vizeletvizsgálat

A kérdésre adott válasz arra a kérdésre, hogy hogyan lehet a tuberkulózis vizeletvizsgálatát elvégezni, nagyon egyszerű. A tuberkulózis vizelete összegyűjti a folyadék minden általános elemzését, amely mindenki számára ismerős a gyermekkortól:

  1. A vizelet első adagját reggel kell összegyűjteni, míg csak a középső részt gyűjtik, és nem az, amelyik elhagyja az elsőt vagy az utolsóat.
  2. A gyűjtést megelőzően mind a tartályt, mind a vizelet-genitális szerveket alaposan meg kell mosni, hogy semmi se felesleges ne jusson be az üvegbe: fehérje, vér, mikrobák stb.
  3. A vizsgálathoz szükséges folyadékmennyiség mindössze 50-100 ml, ezért ne hozjon fél liter liter vizes vizet.

Az OAM bármilyen klinikán vehető el, azonban csak speciális laboratóriumok találhatnak tuberkulózis tuberkulákat, amelyek nem állnak rendelkezésre minden oroszországi településen. A felmérés normális eredménye így néz ki:

  1. Szín: sárga, napsárga-sárga vagy szalma.
  2. Átlátszóság: magas.
  3. Szag: unsharp.
  4. Reakció pH: 4-7.
  5. Sűrűség: 1012-1022 g / l.
  6. Fehérje: nem, de néha 0,033 g / l érték is megengedhető.
  7. Glükóz: legfeljebb 0,8 mmol / l.
  8. Keton testek: nem.
  9. Bilirubin: nem.
  10. Urolilinogén: 5-10 mg / l.
  11. Hemoglobin: nem.
  12. Eritrociták: a nőknél a megengedett legmagasabb érték legfeljebb három, a férfiaknál legfeljebb 1 a látószögben.
  13. Leukociták: a megengedett testek száma a nők körében 6 és férfiaknál legfeljebb három.
  14. Hámsejtek: legfeljebb 10 db. szemmel.
  15. Hengerek: nincs vagy nincs egyéni hialin.
  16. Sók: nem.
  17. Baktériumok: nem.
  18. Gombák: nem.
  19. Paraziták: nem, de ha igen, akkor nem szörnyű: csak ebben az esetben az anthelmintás gyógyszerek terápiáját végezzük.

A tuberkulózis OAM mutatói általában azonosak. Az egyetlen kivétel a heveny formája a betegség, amikor a vizelet változik fellépő rendellenességgel belső szervekben és a krónikus sérülések esetén, a tüdő vagy a csontok, amikor a vizsgálati eljárás lehet tünetei amyloidosis - rendellenességek fehérje-anyagcsere, amelyben a fehérje jelen lesz a felmérés eredményeit.

Kivételt képez ez alól a tuberkulózis a vese vagy húgyvezeték - a leggyakoribb extrapulmonális által okozott betegség átadását a véráramba jutó fertőzések, tuberkulózis elemzése a vizeletben nagyon változó. Ebben az esetben a következő jelenségek figyelhetők meg:

  • élesen savas, tartós reakció;
  • leukocituria - fehérvérsejtek a vizeletben;
  • proteinuria - a fehérje a vizeletben;
  • eritrocituria - vér a vizeletben;
  • pyuria - a vizeletürítés.

Szintén akut betegség vagy alatt a tuberkulózis a vese-és húgyúti fertőzések a vizeletben van jelen bacillusok aktív formája szert, amelyek a festéssel határozzuk meg Ziehl-Nelson.

A nyál vizsgálata

Tény, hogy az LHC nem termel nyálkatesztet a tuberkulózisra. A nyál elemzésével gyakran a tudatlan emberek a köldököt vizsgálják tuberkulózisra. Ahelyett, köpet elemzése nyál a TB lehet tenni csak abban az esetben nagyon kicsi újszülöttek, akik nem tudják, hogy köpni a folyékony köptető, mert automatikusan lenyeli egyszer után azonnal köpködés. Azonban ebben az esetben, az orvos egyszerűen csak egy biopsziás szövet vagy visszavonja tüdő titkos mintával, nem mászik a nyál.

A kórokozóra a sputum elemzést Tsilya-Nelson módszerrel végezzük. Ebben az esetben, amellett, hogy a bacilusok vannak jelei a tüdő patológiai látható szabad szemmel: rostos vet, genny, vér, darab szövet, és az úgynevezett lencse - nagy zárványok egy csipetnyi kevésbé kör alakú, amelynek belsejében általában rengeteg baktériumok.

Ziehl-Nelson festési módszer

A Tsilya-Nelson festési módszere a mycobacterium tuberculosis savállóságán alapul, amely csak hőkezeléssel megfesthető. Abban az időben ez a tanulmány, testszövet, köpet, vizelet, vér, vagy bármilyen más anyag, amelyek elemzése a jelenléte a Hivatal kell hagyni egy kedvező környezet vetőmag szaporítására bacillusok, ha ott vannak, természetesen, majd melegítjük, és foltos. Ezután minden megmarad a savban, amíg az elszíneződés meg nem szűnik, és a szín már nem melegszik más színben. Ennek eredményeképpen az MBT viszonylag könnyen észlelhető, mivel az első szín színének marad, és jól mutat az általános háttérrel szemben.

Jegyzettömb a pszichiátria - tuberkulózis

Minden, amit tudni akar a tuberkulózisról

Vér- és vizeletvizsgálat tuberkulózisra

VA Koshechkin, Z.A. Ivanova

Vörösvértestek, mint általában, csekély változás a tuberkulózisban. Csak a tüdő vagy a belekben fellépő akut veszteség után lehet vérszegénység. A hemoglobinszint kismértékű csökkenése a szálas-cavernosus tüdő tuberculosis krónikus formáiban figyelhető meg.

A tuberkulózis-aktivitás egyik mutatója az ESR (az eritrociták ülepedési aránya). A gyorsított ESR korreláció nemcsak a jelenlegi friss folyamat aktivitásával és kiterjedésével, hanem a krónikus, különösen rostos-üreges folyamatok súlyosbodásával is összefügg.

A vér leukocita frakciójának elemei aktívan reagáljon a tuberkulózisra.
Hagyományosan a vér leukocita-frakciójában három olyan változás lépett fel, amelyek a tüdő tuberkulózisában fellépő elváltozások jellegéhez kötődnek.
1. A küzdelem neutrofikus fázisa. A vérben a neutrofilek aránya növekszik, ennek következtében a képlet eltolódik a bal oldalon. Az eozinofilek hiányoznak, a limfociták és a monociták száma csökken.
2. A monocita fázis - A fertőzés leküzdése. A vérben megnövekszik a limfociták száma, a vér formula balra tolódik, a neutrofilek száma csökken, egyetlen eozinofileket észlelnek.
3. Helyreállítási fázis. A limfociták és az eozinofilok aránya nő. A vérszám fokozatosan normalizálódik.
Ez a fázisszétválás csak a teljes vérreakciót tükrözi.

A neutrofilok nukleáris eltolódása a tuberkulózisban
A mennyiségi szempontok alapján a neutrofil csoport minőségi jellemzője, amely sokkal vékonyabb, és korábban különböző kóros folyamatokat jelez.

A felnőttkori tuberkulózis általában másodlagos folyamat, leggyakrabban a vérben csak a stab neutrofilek növekedését okozza. Amikor kifejezve infiltratív formák és tüdőgyulladásos tüdőszövet bomlási jelenségek neutrofilek balra léptető érzékel elég világosan és elérheti 20-30% stab.

Pulmonalis infiltráció azonos nem csillapodik, és fokális TB során az első súlyosbodása vagy azonosítását, subfebrile hőmérséklet és az alig észrevehető funkcionális zavarok olyan kevésbé váltás. Ugyanakkor a hemogram fennmaradó elemei egyáltalán nem képesek kimutatni a rendellenességeket. Ezért a nukleáris eltolódás alapos meghatározása különösen fontos a tuberkulózisban.

A tana nukleáris eltolódása neutrofilek készült Arnet (1905) alapján, a tanulmány során a vér a különböző fertőzések, beleértve a tuberkulózist.

Számtalan vázlattal nehéz számításokat végzett, Arnet észlelt egy bizonyos szabályosságot a neutrofil magok konfigurációjában.

Az egészséges ember vére tartalmaz:

  • A neutrofilek 5% hígítatlan nyakával, szegmentálatlan maggal (1. osztály);
  • A neutrofilek 35% -a két szegmenst összekapcsolva egy szálon átmenő szűkület (II. Osztály);
  • A neutrofilek 41% -a három szegmenssel (III.
  • A neutrofilek 17% -a négy szegmenssel (IV.
  • A neutrofilek 2% -a öt szegmenssel (V osztály).

A rendszermag szegmentálásán kívül az Arnet is figyelembe vette annak alakját. Ezért az első osztályban több alosztályt különített el a nem szegmentált mag depressziójának mértékéről. A fennmaradó osztályok alosztályokra vannak osztva a szegmensek alakjától függően.

A fertőzések aránya a súlyosságuk mnogosegmentirovannyh számú formák csökken, a számot malosegmentirovannyh (2-3 szegmens) és a nem-szegmentált (amelyek viszonylag fiatal sejtek) növekszik.

Az A reakcióvázlat Arnet számú nem-szegmentált neutrofilek I. osztályú bemutatott, a bal oldalon; a jobb oldalon van a sejtek száma a II osztályú, III osztályú majd t. d. Következésképpen, a növekedés a nem-szegmentált formában és száma malosegmentirovannyh bal oldali áramköri sejt növekszik, és van egy „bal shift”.

vizeletvizsgálat
A tuberkulózisban szenvedő betegeknél a vizelet ürülése majdnem normális. A vizelet patológiás változásai lehetnek, ha a tuberkulózis a vesére vagy a húgyutakra hat.
A krónikus tüdő tuberkulózis vagy csontos betegségben szenvedő betegeknél az amyloidosis jele lehet.

3.7 Vér- és vizeletelemzés.

A vörösvértestek általában csekély mértékben megváltoznak a tuberkulózissal. Csak a tüdő vagy a belekben fellépő akut veszteség után lehet vérszegénység. A hemoglobinszint kismértékű csökkenése a szálas-cavernosus tüdő tuberculosis krónikus formáiban figyelhető meg. A tuberkulózis-aktivitás egyik mutatója az ESR (az eritrociták ülepedési aránya). A gyorsított ESR korreláció nemcsak a jelenlegi friss folyamatok aktivitásával és kiterjedésével, hanem a krónikus, különösen a rostos-barnító folyamatok súlyosbodásával is összefügg. A vér leukocita frakciójának elemei aktívabban reagálnak a tuberkulózis folyamatára.

Hagyományosan a vér leukocita-frakciójában bekövetkező változások három fázisa összefügg a tüdő tuberkulózisának elváltozásainak jellegével:

  1. Neutrofil - a küzdelem fázisa. A vérben a neutrofilek aránya megnövekedett, ennek következtében a vérkészítmény balra tolódik. Az eozinofilek hiányoznak, a limfociták és a monociták száma csökken. A lymphopenia a tuberkulózis progresszív formáira jellemző.
  2. A monocita fázis a fertőzés megszüntetése. A vérben megnövekszik a limfociták száma, a vér formula balra tolódik, a neutrofilek száma csökken, egyetlen eozinofileket észlelnek.
  3. A helyreállítási fázis. A limfociták és az eozinofilok aránya nő. A vérszám fokozatosan normalizálódik.

Ez a fázisok szerinti megosztás csak olyan általános vérreakciókat tükröz, amelyek nem tükrözik a krónikus tuberkulózis-fertőzésre adott vérreakciók összetettségét.

A neutrofilok nukleáris eltolódása a tuberkulózisban.
A mennyiségi szempontok alapján a neutrofil csoport minőségi jellemzője, amely sokkal vékonyabb, és korábban különböző kóros folyamatokat jelez. A felnőttkori tuberkulózis, általában az elsődleges folyamat után, a vérben csak a stab neutrofilek növekedését okozza. Amikor kifejezve infiltratív formák és tüdőgyulladásos tüdőszövet bomlási jelenségek neutrofilek balra léptető érzékel elég világosan és elérheti 20-30% stab.

A pulmonális infiltrációs nélkül szétesési és fokális TB során az első súlyosbodása vagy azonosítására a subfebrile hőmérsékleten és éppen észlelhető a funkcionális rendellenességek nyújt kevésbé kifejezett váltás. Ebben az esetben, a fennmaradó elemeit vérképlet lehet teljesen lemondani eltérések a norma. Ezért a nukleáris eltolódás alapos meghatározása diagnosztikai jelentőséggel bír a tuberkulózisban.
A neutrofilok nukleáris eltolódásának doktrínáját az Arneth a különböző fertőzésekre és különösen a tuberkulózisra vonatkozó vérvizsgálat alapján fejleszti. Számtalan vázlattal nehéz számításokat végzett, Arnet észlelt egy bizonyos szabályosságot a neutrofil magok konfigurációjában. Az egészséges személy vérében a neutrálisok hígítatlan szűkületekkel, szegmentálatlan maggal (I. osztály) 5%; neutrofilek, két szegmenst összekapcsolva, filiform konstrikcióval (II. osztály), 35% -kal, III. 41% -os, IV-es 17% -os és V-osztályú 2% -kal. A fertőzések aránya a súlyosságuk csomó számú szegmentált formában csökken, a számú szegmentált kis (2-3 szegmens) és a nem-szegmentált növekszik. Az Arnet rendszerben a nem szegmentált neutrofilek számát balra írjuk; van elhelyezve, hogy a megfelelő a sejtek száma a II osztályú, III osztályú majd t. d. Ezért, számának növelésével a nem-szegmentált, és a bal oldalon a cella áramkörök formájában szegmentált kismértékben fokozódik, és van egy „bal shift”.

A tuberkulózis jelei a hemogram változása mellett a hyponatraemia. Ez a legfontosabb anyagcsere-eltolódás. A hyponatriémia oka a tuberkulózis által okozott tüdőszövet kialakulása antidiuretikus hormonális anyaggal. Különösen intenzíven, ez az anyag a széles körben elterjedt, károsodást okozó formák idején keletkezik.

Vizeletvizsgálat.
A vizelet kiválasztása tuberkulózisban szinte normális. A vizelet patológiás változásai lehetnek, ha a tuberkulózis a vesére vagy a húgyutakra hat. A vizeletben fehérjék, fehérvérsejtek, MBT található. Krónikus tüdő tuberkulózis vagy csontos betegségben szenvedő betegeknél az amyloidosis (perzisztens preteinuria, makro-hematuria) jeleit lehet azonosítani.

A tuberkulózis diagnosztizálása vérrel és vizeletvizsgálattal

A vörösvértestek általában csekély mértékben megváltoznak a tuberkulózissal. Csak a tüdő vagy a belekben fellépő akut veszteség után lehet vérszegénység. A hemoglobin szintjének enyhe csökkenése a fibro-cavernosus tüdő tuberculosis krónikus formáiban fordul elő.

A tuberkulózis-aktivitás egyik mutatója az ESR (az eritrociták ülepedési aránya). A gyorsított ESR korreláció nemcsak a jelenlegi friss folyamat aktivitásával és kiterjedésével, hanem a krónikus, különösen a fibro-cavernosus folyamatok súlyosbodásával is összefügg.

A vér leukocita frakciójának elemei aktívabban reagálnak a tuberkulózis folyamatára.

Hagyományosan a vér leukocita-frakciójában három olyan változás lépett fel, amelyek a tüdő tuberkulózisában fellépő elváltozások jellegéhez kötődnek.

  1. A küzdelem neutrofil fázisa. A vérben a neutrofilek aránya növekszik, ennek következtében a képlet eltolódik a bal oldalon. Az eozinofilek hiányoznak, a limfociták és a monociták száma csökken.
  2. A monocita fázis a fertőzés megszüntetése. A vérben megnövekszik a limfociták száma, a vér formula balra tolódik, a neutrofilek száma csökken, egyetlen eozinofileket észlelnek.
  3. A helyreállítási fázis. A limfociták és az eozinofilok aránya nő. A vérszám fokozatosan normalizálódik.

Ez a fázisszétválás csak a teljes vérreakciót tükrözi.

A neutrofilok nukleáris eltolódása a tuberkulózisban

A mennyiségi szempontok alapján a neutrofil csoport minőségi jellemzője, amely sokkal vékonyabb, és korábban különböző kóros folyamatokat jelez.

A felnőttkori tuberkulózis általában másodlagos folyamat, leggyakrabban a vérben csak a stab neutrofilek növekedését okozza. Amikor kifejezve infiltratív formák és tüdőgyulladásos tüdőszövet bomlási jelenségek neutrofilek balra léptető érzékel elég világosan és elérheti 20-30% stab.

Pulmonalis infiltráció azonos nem csillapodik, és fokális TB során az első súlyosbodása vagy azonosítását, subfebrile hőmérséklet és az alig észrevehető funkcionális zavarok olyan kevésbé váltás. Ugyanakkor a hemogram fennmaradó elemei egyáltalán nem képesek kimutatni a rendellenességeket. Ezért a nukleáris eltolódás alapos meghatározása különösen fontos a tuberkulózisban.

A tana nukleáris eltolódása neutrofilek készült Arnet (1905) alapján, a tanulmány során a vér a különböző fertőzések, beleértve a tuberkulózist.

Számtalan vázlattal nehéz számításokat végzett, Arnet észlelt egy bizonyos szabályosságot a neutrofil magok konfigurációjában. Az egészséges ember vére tartalmaz:

  • 5% neutrofilek hígítatlan nyakkal, szegmentált mag (1. osztály);
  • A neutrofilek 35% -a két szegmenst összekapcsolva egy szálon átmenő szűkület (II. Osztály);
  • A neutrofilek 41% -a három szegmenssel (III.
  • A neutrofilek 17% -a négy szegmenssel (IV.
  • A neutrofilek 2% -a öt szegmenssel (V osztály).

A rendszermag szegmentálásán kívül az Arnet is figyelembe vette annak alakját. Tehát az osztály számára számos alosztályt különített el a nem szegmentált mag depressziójának mértékéről. A fennmaradó osztályok alosztályokra vannak osztva a szegmensek alakjától függően.

A fertőzések aránya a súlyosságuk képez mentális típusú mnogoseg- száma csökken, a szám malosegmentirovannyh (2-3 szegmens) és a nem-szegmentált (amelyek viszonylag fiatal sejtek) növekszik. Az Arnet-rendszerben az I. osztály nem szegmentált neutrofiljeinek száma a bal oldalon látható; a jobb oldalon van a sejtek száma a II osztályú, III osztályú majd t. d. Következésképpen, a növekedés a nem-szegmentált formában és száma malosegmentirovannyh bal oldali áramköri sejt növekszik, és van egy „bal shift”.

vizeletvizsgálat

A tuberkulózisban szenvedő betegeknél a vizelet ürülése majdnem normális. A vizelet patológiás változásai lehetnek, ha a tuberkulózis a vesére vagy a húgyutakra hat.

A krónikus tüdő tuberkulózis vagy csontos betegségben szenvedő betegeknél az amyloidosis jele lehet.

35. A vér és a vizelet vizsgálatának diagnosztikai értéke tuberkulózisban szenvedő betegeknél.

Vérvizsgálat A hemoglobin és az eritrociták a legtöbb esetben változatlanok maradnak, kivéve az akut vérveszteséget. Az aktív tuberkuláris folyamat jelenlétét jelző mutató a vörösvérsejt-üledék aránya. A gyorsított ESR nemcsak a friss aktív tuberkulózisra jellemző, hanem a krónikus folyamat súlyosbodására is. A vérvizsgálat fennmaradó paraméterei nagyban különböznek a tüdőkárosodástól. Perifériás paraméterek változásai. vér tuberként. nincs specifikusság, azonban a hemogram segít diagnosztizálni. fázisú tuberk. és értékelje a súlyosságot. annak áramlását. Azok a személyek, akiket tuberkulózisra és tuberkulózisra vizsgálták. hozzárendelt obscheklin. egy vérvizsgálat az ESR meghatározásával, amely eterr. és a leukémia, a hemoglobin koncentrációja és a leukocita képlet számolása. A tuberkulózisban szenvedő pémia jelenlétét javasolják. hogy megállapítsák a retikulociták számát a regenerátumok értékeléséhez. a csontvelő képességét differenciáldiagnosztikai esetekben - a vérlemezkék tartalmát. A hematológus változásai. Az indikátorok egyrészt a fertőzés lokalizációjától, természetétől és súlyosságától függenek. folyamat, másrészt - a szervezet állapotáról, a kompenzációs tartalékairól. Hemogram har. hanem a folyamat fázisa, mint az ék. formálni. Például azoknál a betegeknél, akiknél a tuberkulózis széles körben elpusztult formája van, a folyamat kompenzálása és a friss gyulladás hiánya. a vérminták változása lehet a norma. A csövek súlyosbodása. a folyamatot általában szúrt neutrophil eltolódás, lymphopenia és az ESR növekedése kísérte. Tot. fehérvérsejtszám. a legtöbb beteg normál határokon belül van. Csak az akut és súlyos betegséget jellemzi a vérben a leukociták 15 x 109 / L-os növekedése. A leukocita formula balra történő neutrofil eltolódása jelentősebb lesz. A betegség súlyossága miatt (különösen miliaris tuberculosis esetén) a myeloid típusú leukemoid reakció léphet fel. Az akut folyamat felhalmozódása a jelzett változások normalizációját, a limfocitózis megjelenését okozza. A neutropenia és a limfocitózis krónikus hematogén terjesztésben és fokális tuberkulózisban megfigyelhető.

vizeletvizsgálat. A pulmonalis tuberculosisban szenvedő beteg vizeletének elemzésében nincsenek észrevehető rendellenességek. A változások csak a vesék és a húgyutak tuberkulózisában jelentkeznek. A tuberkulózis rutin vizeletvizsgálata nemcsak veseelégtelenség esetén szükséges. Az utóbbiban. ő az egyetlen. a korai diagnózis érdekében. A vizelet tartós jelenléte a vizeletben, és ami a legfontosabb, a tuba. a baktériumok természetesen a csőre mutatnak. vese. Azonban néha szükséges. -Issled. vizelet a patológus kimutatására. megállapításait; így néhányan. a tuberkulózis formái. vizeletvizsgálat havonta (terjesztett formák, bonyolult elsődleges komplex). Kis mértékű változások a vizeletben fehérje nyomokban, egyedülálló formában. a leukociták és a friss vörösvérsejtek rendszeresen kimutathatók az általános mérgezés jelenségeként. Végül, néhány vizeletes reakciók jelzik a folyamat súlyosságát. Közülük a diazor-reakció megjelenése általánosságban. a tuberkulózis formái, különösen a miliaris tuberculosis miatt.

Kétségtelen, hogy a prognosztikai érték a tuberkulózis során urochromogen hatással bír. Ez nagyon egyszerű, és ez a nagy előnye. Ő gyárt. jelet. Vegyük a szűrt vizeletet és hígítsuk 10-szer. Öntött két csőbe, az egyik vezérlő és hozzáadtuk egy másik kálium-permanganát oldattal 1: 1000. Amennyiben pozitív válasz in vitro kapott éles kanári festéssel amely feltárta nagyon világos, ha összehasonlítjuk a kontroll. Szükséges csak jól kifejezni. színét. A reakció mechanizmusa az, hogy a kálium-permanganát a vizeletben színtelen urochromogént oxidál, ami progresszív tuberkulózissal szignifikáns mértékben emelkedik.

Milyen tesztek vannak a tüdő tuberkulózisára?

Minden betegnél laboratóriumi vizsgálatokat végeznek. Mivel a patológia másoknak fertőző, a biológiai anyag időszerű vizsgálata hozzájárul a diagnózis pontosságához, és segít a betegség kezelésének nyomon követésében.

A tüdő tuberkulózisára vonatkozó laboratóriumi vizsgálatok listája

A tuberkulózis vizsgálata

A tüdő tuberkulózisra vonatkozó kötelező vizsgálatok listája a következő:

  • köpetvizsgálat - barlangok, rizs testek, fehérje, rugalmas rostok, kalcium sók jelenlétében találhatók;
  • váladék analízis - neutrofileket és endothelsejteket mutat leukociták túlsúlyával;
  • bronchoalveoláris mosóvizsgálat Ez azt jelzi, csökkentett mennyiségű alveoláris makrofágok egy éles növekedést neutrofilek aktív TBC a folyamat során, és ha alvás közben metrikák makrofágok kis mértékben nőtt;
  • szerológiai vizsgálatok, vagy enzim immunoassay, a mycobacterium antigének szérum immunglobulinjainak meghatározására. Az antitestek diagnosztikus titerének aránya a betegség kórokozójához viszonyítva meghaladja az 1: 8 értéket.

Mit mutatnak a vérvizsgálati eredmények?

Mivel a biokémiai elemzés vér tüdő tuberkulózis szakértők lehetősége van arra, hogy meghatározzuk a tájolás és a fehérje változások és frakciói a szérumban is. Ez meghatározza a betegség formáját és stádiumát. A húgysav, a réz, a koleszterin és a lizozim szintjét túllépik. A kreatin-kináz és az angiotenzin-konvertáló enzim aktivitását figyelték meg. Az alacsonyabb pH és a megnövekedett pCO2 miatt a légzőszervi acidózis kialakul.

Ami a hemoglobin paramétereit illeti, azok csökkentése, ami a vérszegénység kialakulásához vezet, nem jellemző a tuberkulózis folyamatára.

A vizeletürítés tuberkulózisban szenvedő betegeknél

Vizeletvizsgálat a tüdő tuberkulózisára?

A vizelet kiválasztása tuberkulózisban továbbra is normális. Patológiai változások általában akkor fordulnak elő, amikor a vesék és a húgyutak érintettek a tuberkulózis folyamatában. Krónikus betegségben szenvedő betegeknél a vizsgálat során az amyloidosis jelei kimutathatók.

Mit mutat a vizelet vizsgálata a tüdő tuberkulózisában, milyen információk jelezhetik a patológiás folyamat fejlődését a szervezetben?

  1. A sűrűség 1,015-1,025.
  2. A vörösvértestek egyetlen jelenléte megengedett, gyermekeknél - legfeljebb 5.
  3. A leukociták nem lehetnek 2 egységnél, a nőknél és a lányoknál - legfeljebb 5 egység.
  4. A só értékének nem szabad jelentősnek lennie.
  5. A lapos hám megengedhető értéke legfeljebb 5 egység.

Mi fog mutatni vérvizsgálatot a tüdő tuberkulózisára

A tuberkulózis veszélyes és bonyolult betegség a kezelésben. A kezelés hatékonysága attól függ, mennyire időszerű. Senki sem mentes a fertőzéstől, mindenki betegségben szenvedhet: felnőttek, gyerekek, idős emberek.

A szükséges időben történő kezelés hiányában zárt formában belép veszélyes nyitva, ezért a betegség korai szakaszában a diagnosztika rendkívül fontos, és ezt rendszeres és átfogó felmérésekkel lehet elérni.

Ebben a cikkben különböző módszereket fogunk megvizsgálni a tüdőbetegség diagnosztizálására, és megpróbáljuk meghatározni, hogy a tüdő tuberkulózisának mely vérvizsgálata a legmegbízhatóbb és informatívabb.

Ha szükség van a tuberkulózis ellenőrzésére

Ezért a felmérés akkor szükséges, ha:

  • kapcsolat a betegség hordozóival;
  • általános gyengeség;
  • súlycsökkentés;
  • a hőmérséklet emelkedése este;
  • krónikus köhögés.

Különösen fontos a gyermekkori tuberkulózis jelenlétének meghatározása időben, mert nagyon valószínű, hogy a gyermekeknél a fertőzés további kóros folyamatok a testben.

Fontos! Az egyik megelőző intézkedés a BCG vakcinázás a 4 nap élet gyermek és a 7 éves kor. A gyermek teste gyengébb, mint felnőtt, ezért fontos védeni a fertőzéstől és a vakcinázástól.

A gyanított tuberkulózisra vonatkozó vizsgálatok

A tuberkulózis számos módon azonosítható.


Fotó 1. A tuberkulózisban szenvedő beteg mellkasának röntgenfelvétele. A fluorográfia az egyik legmegbízhatóbb módszer a betegség diagnosztizálására, de a leghatékonyabb egy másokkal együtt. Például egy részletes vérvizsgálat már korai stádiumban is megjelenik a tuberkulózisban.

  1. Röntgenvizsgálat.A tüdőkárosodás mértékének meghatározása segít a fluorográfiának. Ugyanakkor szem előtt kell tartani, hogy a betegség kialakulásának kezdeti szakaszai nem lesznek láthatóak a röntgensugáron. A vizsgálatnak átfogónak kell lennie. A teljesebb vizsgálat érdekében a páciens tüdejét mind az elülső, mind a hátulról le kell fényképezni.
  2. Tuberkulin teszt. A gyermekek vizsgálatakor leggyakrabban a tuberkulin teszt (Mantoux reakció) alkalmazható. A tuberkulin a halott kórokozókból izolált fehérjék keveréke. A gyógyszer bejuttatása a bőr alá okozza az immunitás reakcióját, amely különböző módon manifesztálódik. Ha nincsenek kórokozók a szervezetben, akkor néhány nappal az injekció beadása után alig látható nyom lesz. Ha a minta befecskendezésének helyét vagy a fekély gyulladását okozza, a beteg fertőzésének valószínűsége magas.

Fontos! A Mantoux-reakció nem teszi lehetővé a tuberkulózis 100% -os valószínűséggel történő meghatározását, de segít meghatározni a betegség kockázati csoportját. Óvatosan, érdemes kipróbálni azokat, akik allergiásak. A szervezet összetételének bevezetése kiszámíthatatlan módon reagálhat.

  1. tanulmányvizeletés a vér. Az eredmények segítenek a kórokozó nyomainak kimutatásában. Hozzárendelt a betegség végső diagnózisa és mértéke meghatározásához.
  2. struktúraköpet. A mycobacterium tuberculosis jelenléte lehetővé teszi a sputum meghatározását és tanulmányozását. Az anyag a fehérje normálértékének feleslegét mutatja, ami megkülönbözteti a hörgő köpetből, valamint a fertőzés kórokozóitól.

Lehetséges-e a tuberkulózis általános vérvizsgálattal történő meghatározása

struktúra vörösvértesteket (vörösvértestek) a baktériumok jelenlétében jelentéktelen mértékben változik. Akut bél- vagy tüdővérzés provokál vérszegénység, jelentős a hemoglobin csökkentése.

Vannak olyan emberek, akik kételkednek abban, hogy a tuberkulózis véralvadással meghatározható-e. Valójában egy általános elemzés képes azonosítani a fejlődő gyulladásos és patológiás folyamatokat a szervezetben az ESR fokozott aránya. A fokozott index nemcsak a jelenlegi gyulladás aktivitását és időtartamát, hanem a krónikus állapot súlyosbodását is jelzi, különösen a betegség utolsó szakaszában.


Fotó 2. Az orvos a fecskendővel végzi el a vérvételt a páciens vénájából. Ezután vérvizsgálatot végzünk, tuberkulózissal, amelynek mutatói a gyulladásos folyamatokat jelzik.

Fontos! Az ESR szintje összezavarható a gyulladás vagy a tüdőrák mutatóival. Ebben az esetben meg kell vizsgálni az eozinofilek száma (a leukociták egyike). Ha az eozinofilok megnagyobbodnak, és a leukocita formula a vérvizsgálat hirtelen változásait mutatja, akkor ez tuberkulózissal történik, és tüdőgyulladással kizárt.

A klinikai és biokémiai vérvizsgálatok pontosak?

A pulmonalis tuberculosis klinikai vérvizsgálata gyakran nem elegendő a diagnosztizáláshoz tubercle bacillus. Ezután további átfogó vizsgálat szükséges. Ugyanez mondható el a biokémiai vérvizsgálatról. A kezdeti stádium vagy látens forma tuberkulózisával valószínűleg nem mutat semmilyen rendellenességet. Csak a betegség akut formáival csökkenti az albumin-globulin koefficiensét.

A tuberkulózis elleni antitestek vérvizsgálatai

Pontosabbak, mélyebbek, mint az OAK, vérvizsgálati módszerek, amelyek lehetővé teszik a tuberkulózis azonosítását. Hogyan lehet meghatározni az ilyen vérvizsgálatok, van egy betegség, akkor fontolja meg tovább.

Objektív diagnózis megállapítása a megközelítések alkalmazásával lehetséges polimeráz láncreakció (PCR) és enzim immunoassay (ELISA).

Az ELISA mutatja a tuberkulózis jelenlétét

Segítségével IFA kideríti a kórokozók jelenlétét a betegben. A módszer kényelmes, mivel lehetővé teszi, hogy egyszerre több mintát vizsgáljon. Azonban alacsony érzékenységű és alacsony előfordulási gyakoriságú területeken ajánlott.

Milyen változásokat mutat a PCR módszer?

módszer PCR a legtermékenyebbre utal. A betegség kimutatására, a súlyosság és a remisszió kezelésére a mikrobaktériumok DNS-jének megtalálásával történik.

A PCR-t a következőkre használják:

  • a Koch progresszív szúrásának kimutatása;
  • extrapulmonáris tuberkulózis kimutatására szolgáló vizsgálat;
  • a fertőzés lokalizációjának gyors telepítése;
  • a betegség megismétlődésének diagnózisa;
  • a kezelés folyamata.

Ez azt jelenti, hogy a tuberkulózis elleni antitestek további vérvizsgálatát kellően megbízhatónak kell tekinteni. De vannak mások is.

Alternatív vérvizsgálati módszerek

Kevesebb, mint a PCR és az ELISA, gyakori a kórokozó mikrobaktérium-módszer kimutatására Interferon Gamma Release tesztek. A tuberkulin teszt helyett végezhető. A reakció mikrobaktériumok bevezetésén alapuló gamma-interferon képződését mutatja. Az eredmények pontosan meghatározhatják a fertőzés jelenlétét.

Egy másik alternatív kutatási módszer QuantiFERON-TB Gold. Ezt a módszert leggyakrabban a tuberkulin teszttel súlyos allergiás reakciókat szenvedő gyermekek tesztelésére használják.

Fontos! Mindkét módszer nem teszi lehetővé a fertőzés kialakulásának mértékét - aktív vagy látens.

A kezelőorvos meghatározza, hogy milyen típusú vérvizsgálatot fog használni. Leggyakrabban a tanulmány komplex módon zajlik le. A vérnek a tuberkulózis látens formájában történő elemzése általában nem eredményez eredményt.

Hogyan dekódolják a vérvizsgálati eredményeket?

Az általános vérvizsgálat értelmezésekor érdemes figyelni az ESR, a hemoglobin, a leukociták szintjére.

ESR szintje egy egészséges ember lesz kevesebb, mint 50 egység, ennek a mutatónak a túllépése gyulladásos folyamatot jelez a szervezetben.

Leukociták száma a vérben a tuberkulózisban szenvedő beteg eléri 6 in 10 9 / liter, a betegség akut és súlyos eseteiben - 12-15-10 9 / L.

A vörösvértestek összetétele a legtöbb beteg normális marad. Az alacsony hemoglobin fixált militar tuberkulózissal, esetleges tüdőgyulladással.

A betegség akut, progresszív és bonyolult formái megváltoznak leukogram. Egyes esetekben mérsékelt leukocitózisakár 10 000-15 000 fehérvérsejt), ritkábban leukopenia.

Akárki is végzi a tüdő tuberkulózis vérvizsgálatát, a megfejtésük tapasztalt szakemberek munkája. Csak azt tudják pontosan meghatározni, hogy mennyi tuberkulózist indítanak, ha megtalálják. Az ELISA és a PCR analízisét megfejtettük. Speciális formák esetén negatív vagy pozitív eredményt mutat az észlelt fertőzéssel szemben.

Vizsgálati típusok a kezeléshez

A kezelés nehézsége az, hogy a fertőzés válhat stabil bármilyen antibiotikumra, különösen a fejlett szakaszokban, valamint hosszú távon inkubációs időszak, amely alatt nem lehet meghatározni a fertőzést.

A megfelelő terápia azonosítása és felírása után a helyreállítási folyamatot rendszeres időközönként monitorozzák Havonta 1-2 alkalommal. A beteg vér és váladék.


Fotó 3. Orvosi asztal az orvosi rendelőben a köpetbegyűjtést követően. A köpetből származó mintákat műanyag kémcsövekbe zárják, és laboratóriumi vizsgálatokat várnak.

Az általános vérvizsgálat, a Mantoux-teszt, a fluorográfia szinte minden orvosi központban elvégezhető, ha azonnal gyanú merül fel. A megállapítások alapján a terapeuta megállapítja a távollétet patológiai változások a testben vagy iránymutatásokat adjon a TB-ban.

Speciális és pontosabb vizsgálatokat végeznek TB orvosi rendelőkben, amelyek laboratóriumokkal és a szükséges reagensekkel vannak felszerelve.

Tehát összegezve a fentieket:

  • tuberkulózis veszélyes betegség, ami rendkívül fontos időben történő észleléshez;
  • növelte az ESR-t, blackout a tüdőben, a leukogram változása megalapozza a páciens további vizsgálat céljából történő elküldését a fertőzés azonosítására;
  • a kezelést az alábbiak segítségével végzik: antituberculos gyógyszerek; A kezelés intenzív fázisa addig folytatódik, amíg a klinikai és radiológiai indexek pozitív dinamikája meg nem születik.

Hasznos videó

Kínálunk egy videó megtekintését, amely arra a kérdésre is választ ad, hogy lehetséges-e a tuberkulózis vérvizsgálattal történő azonosítása. Részletezi a QuantiFERON TB Gold quantiferon-tesztjét, amely a tuberkulózist mutatja az immunválasz vérvizsgálatában.

A tuberkulózis általános vérvizsgálatának dekódolása felnőttek és gyermekek körében

A tubercle bacillus fertőzés már nem egy mondat egy személy számára. A modern orvoslás hatékony eszközökkel küzd a betegség ellen, ha korai stádiumban van. Időben a patológia kimutatásához segítséget nyújtanak a rendszeres megelőző vizsgálatoknak és vizsgálatoknak, beleértve a tuberkulózis általános vérvizsgálatát.

A klinikai kép megváltozása

A pulmonalis tuberculosis (UAC) teljes vérvizsgálatának nincs specifikus megnyilvánulása. A gümőkór kialakulásáról beszélő jelzők, és a betegség színpadának meghatározása nem létezik. De a nem specifikus tünetek esetén rejtett gyulladásos folyamatot és gyanítható változásokat lehet megítélni a tüdőben.

Az eritrociták normális eltérése

Lassú formában vagy lokalizált elváltozás esetén a vörösvértestek száma a vérben nem változik, de színük megváltozik. A hemoglobin szintje csökken a vörösvérsejtekben. Ezt az állapotot hipokrómnak nevezik.

A tüdőszövetek jelentős infiltratív elváltozásai esetén a klinikai vérvizsgálat a vörösvértestek számának csökkenését, a méretük csökkenését mutatja. Éretlen sejtek - retikulociták, amelyek a vörösvérsejtek "prekurzorai". A tuberkulózis kezdeti szakaszában a retikulociták mennyisége nem haladja meg a 0,5% -ot.

A súlyos vérszegénység gyakoribb a felnőtteknél, akiknek fejlett formája a tuberkulózis. Ebben az esetben a retikulociták száma a vörösvértestek teljes számának 1% -ára emelkedik.

A leukocita formula eltolása

A leukociták mint immunrendszer sejtjei elsősorban a betegségre reagálnak. A vér általános analízise és a leukogramok vizsgálata határozza meg mind a gyulladásos folyamatot, mind a stádiumát.

A bonyolult zárt formában jelentősen nő a neutrofilek száma - a fehérvérsejtek száma, amelyek felelősek a bakteriális fertőzés leküzdéséért. A promyelocyták - éretlen leukocita sejtek, amelyek általában nem fordulnak elő.

Az elhúzódó, súlyos tüdő tuberkulózisát a neutrofilek degeneratív változásai, a kóros granularitás kialakulása kísérte. Az eozinofilek száma élesen csökken. Lymphopenia - a limfociták számának csökkenése. Mindezek a jelek hosszantartó gyulladásos folyamatot jeleznek, amit a genny és a nekrotikus massza képződnek.

Változás az ESR-ben

A tuberkulózis meghatározása aktív fázisban segít az ESR-nek - a vörösvérsejt-szedimentáció sebességének mutatója. A vörösvértestek súlyát és gyors csapódását elősegíti az immunglobulinok, a fibrinogén adhéziója. Általában a férfiak vérszintje nem haladja meg a 10 mm / h-ot, a nőknél - 15 mm / óra. Az ESR 80 mm / h-ig történő gyorsulása jelzi a gyulladásos folyamat aktiválódását a szervezetben.

A mutatók jellemzői a gyermekeknél

A gyermek tuberkulózis vérének elemzése nem különbözik jelentősen a felnőttek változásaitól. Az eredmény dekódolását ugyanarra a mutatóra végezzük:

  • A betegség kezdeti szakaszában a vörösvérsejt-elváltozás jelentéktelen mértékben változik. Az anémia csak akkor mutatható ki, ha az űrlap destruktív. Más esetekben a vörösvérsejtek száma változatlan marad, míg az éretlen eritrociták aránya nő. Gyermekeknél gyanúja lehet a tuberkulózisnak, ha egy retikulocitát 1 ppm felett mutatnak ki.
  • A leukocita indikátorok szintén változásokon mennek keresztül. Fejlődik a leukocytosis - a fehérvérsejtek számának növekedése a neutrofilek miatt, és a limfociták száma jelentősen csökken. A 6 évesnél idősebb gyermekek 40% -ánál a tuberkulózisban a limfociták száma nem haladja meg a 20% -ot.

A betegség korai stádiumában az allergiás reakció kezdetén reagáló eozinofil sejtek száma növekszik. Az éles csökkenés azt jelzi, hogy a folyamat az aktív fázisba kerül.

  • A gyermekkorban az ESR nem haladja meg a 10 mm / órát. Az 50 mm / órás gyorsulás a szervezet védekezésének mozgósítását jelzi a gyulladásos folyamat leküzdésére.

A gyermek esetében a betegség kezdeti stádiuma gyakran nyilvánvaló tünetek és áldozatok nélkül folytatódik az ARVI alatt.

Változások a betegség színpadától függően

Lehetséges-e megállapítani egy tuberkulózis-fókusz jelenlétét laboratóriumi vérvizsgálattal? Sajnos nem. A tuberkulózis általános vérvizsgálata csak a betegség bizonyos szakaszaiban képes kimutatni a gyulladásos folyamatot.

  1. A beszivárgás szakaszában a leukociták kissé reagálnak, az ESR növekszik.
  2. A bomlási fázisban a leukocita formula és az eritrociták jelentős változása következik be.
  3. A disszeminált formában az elemzés során a fent említett eltérések sokkal hangsúlyosabbak lesznek.
  4. Amikor a gyulladásos folyamat megnyugszik vagy visszanyeri, a vörös vér normális állapotba kerül, a leukociták száma és aránya helyreáll.
  5. A tüdő tuberkulózis inaktív formáját az általános vérvizsgálat nem detektálja.

A sikeres kezelés kulcsa a tuberkulózis korai felismerése, és az általános vérvizsgálat olyan módszer, amely lehetővé teszi a látens gyulladásos folyamat megjelenését időben. Bár az elemzés nem tekinthető speciális kutatási módszernek, rövid idő alatt nagy tömegeket tudnak elérni. A tipikus klinikai képen fellépő rendellenességek meghatározásakor a tuberkulózisra és a fluorográfiára vonatkozó specifikus elemzést kapnak.

Ki mondta, hogy lehetetlen gyógyítani a tuberkulózist?

Tuberkulózist diagnosztizáltak. Teljesíti az összes orvosi rendelvényt, de nincs helyreállítás. A maroknyi tablettából a gyomor fáj, gyengeséget és apátságot követ? Talán itt az ideje, hogy megváltoztasd a kezelésed megközelítését.

Az orvosok nem tudják leküzdeni a betegség gyökerét. Olvassa Elena történetét, amely sikerült legyőzni a tuberkulózist. Olvassa el a cikket >>

Az ESR mutatói a tuberkulózisban

Jelenleg a statisztikák szerint a tuberkulózis a leggyakoribb betegség az emberek körében. Leggyakrabban ez a betegség a gyermekeket és a lakosság alacsony jövedelmű szegmenseit érinti. Érdemes megjegyezni, hogy évente a betegek aránya megduplázódik. Ennek kapcsán új gyógyszereket és módszereket fejlesztenek ki a tuberkulózis kezelésére.

A tuberkulózis kialakulásához hozzájáruló fő tényező az immunitás csökkenése, amelyet a környezetszennyezés okozhat. Ennek a betegségnek a diagnosztizálása tesztek és sok más módon végezhető el.

A tuberkulózis vérének elemzése a legfontosabb mutató az emberekben a betegség meghatározására. A tuberkulózis veszélyes fertőző betegség. Érdemes megjegyezni, hogy egy elhanyagolt szakaszban a betegséget nagyon nehéz kezelni, ezért nagyon fontos, hogy időben észleljük a betegséget és kezeljük a megfelelő kórházi kezelést.

A tuberkulózis leküzdésének módjai

A betegségnek levegő-csepp átviteli mechanizmusa van. Így a fertőzés a nyálkahártyán keresztül a kórokozó bejutása a szervezetbe juthat. Ezenkívül a tuberkulózis egy beteg anyától a fejlődő magzatig terjedhet.

Szinte minden esetben a tuberkulózis a légzőrendszerre hat. Különítse el a betegség extrapulmonáris formáját (befolyásolja az emésztőrendszert, a központi idegrendszert, megzavarja a vizuális funkciót, az ízületeket, az urogenitális rendszert).

A betegség fő forrása a mycobacterium - Koch botja. Érinti a tüdőt, a bőrt, a csontokat és sok más szervet. Általános szabályként a tuberkulózis fogyatékossághoz vagy akár egy személy halálához is vezethet. Ha azonban a betegség a lehető leghamarabb diagnosztizálódik, akkor igen alkalmas a kezelésre.

Az ESR mutatói a tuberkulózisban

A tuberkulózis meghatározására szolgáló vérvizsgálat a gyulladásos folyamat klinikai folyamatát mutatja. Normális esetben a vörösvérsejt-üledékek aránya: 1-10 mm / h férfiaknál, 2-15 mm / h nőknél.

Az emberi szervezetbe bejutó kórokozó károsítja a különböző rendszerek szöveteit és szerveit. Beleértve a változó vérmutatókat. Tehát amikor egy botot fertőztek meg, az eritrocita üledékképződés igen erős növekedését figyelték meg. A fehérvérsejtek száma is nő, mert a gyulladásos folyamat a szervezetben zajlik.
A tuberkulózis általában nem okoz jelentős változásokat az eritrocitákban. A kis vérszegénység és az alacsony hemoglobin kialakulása csak jelentős vérveszteséggel alakulhat ki. Így a tuberkulózist az ESR feleslegje kíséri, amely jóval magasabb a rendes értéknél.

tünetek

A tuberkulózis fő tünetei a következők:

  1. Fokozott testhőmérséklet;
  2. Éjszakai izzadás;
  3. A légszomj;
  4. Száraz, erős köhögés köpet (vércsíkok lehetnek jelen);
  5. Általános fáradtság;
  6. Éles súlycsökkenés;
  7. Gyors fáradtság;
  8. letargia;
  9. agresszivitás;
  10. Étvágytalanság;
  11. Fájdalom a mellkasban.

A gyermekek, szemben a felnőttekkel, a leginkább a tuberkulózis fertőzésre fogékonyak. Ezért rendszeresen meg kell vizsgálni a gyermeket, és tesztelni kell Koch pálcáját. A pontos diagnózis lehetővé teszi a pozitív eredmény elérését komoly következmények nélkül.

Vannak, akiknek erős immunrendszere van. Ebben az esetben a betegség tünetei csak a késői szakaszokban jelentkeznek. Meggyengült immunitással a jelek a betegség kezdetén jelennek meg.
A tuberkulózis lassan és fokozatosan fejlődik ki:

  • Elsődleges forma.
    Fertőzés után azonnal kifejlődik. A fő tünetek ebben a szakaszban a nyirokcsomók bővülése.
  • Latent (rejtett forma).
    A betegség kialakulását a tünetek hiánya jellemzi. Továbbá a légzés és köhögés, az étvágytalanság, a túlzott izzadás, a gyors fáradtság során fellépő speciális fájdalmak formájában jelentkeznek. Az ilyen forma nem fertőzőnek tekinthető.
  • Nyitott űrlap.
    A betegség legsúlyosabb formája. A kezelés során meg kell védeni a beteg személyt másoktól zárt egészségügyi intézményekben. Ez a környezettel szembeni biztonság biztosítása érdekében szükséges.
  • Másodlagos forma.
    Az ismételt fertőzés következtében megfigyelhető.

A tuberkulózis diagnózisa

A betegség kimutatása bonyolult a krónikus bronchiális tünetek hasonlósága miatt. A tuberkulózis diagnózisának vezető szerepet játszik a potenciális betegek időben történő tesztelése. Tehát ha egy beteg gyanúja van a tuberkulózisnak, köpetvizsgálatot végeznek. Ennek érdekében a köpet összegyűjti a nap folyamán, és elküldi a laboratóriumba a mycobacteriumok kimutatására.

Érdemes megjegyezni, hogy a tuberkulózis diagnózisának más módszerei vannak a betegek vizsgálatára.

A betegség diagnosztizálásának leghatékonyabb módjai a következők:

  1. B / x vérvizsgálat;
  2. vizeletvizsgálat;
  3. Köpet elemzés;
  4. Mantoux teszt, Pirke;
  5. CT-vizsgálat (számítógépes tomográfia);
  6. Vér-szerológiai vizsgálat (ELISA, PCR);
  7. bronchoscopia;
  8. biopszia;
  9. Pleurális lyukasztás;
  10. mellkas röntgen;
  11. Fluoroszkópiát.

Meg kell jegyezni, hogy a tuberkulózis a koleszterin, a lizozim, a húgysav és a szérum Cu koncentrációjának növekedésével jár együtt. Ezen az alapon a tuberkulózis minden változása nagyon specifikus lehet.

A betegség minden formáját az áramlás, a súlyosság, a diagnózis és a kezelés jellemzi. Ezért, amikor az első tünetek megjelennek, azonnal konzultáljon orvosával és ne öngyógyítson. Mivel csak súlyosbíthatja a helyzetet és súlyosbíthatja állapotát.

Jelenleg számos gyógyszer hatékonyan küzd a tuberkulózis kórokozójával. A személy helyreállításában vezető szerepet játszik időszerű diagnózis és kompetens terápia. Továbbá a páciens általános állapota a betegség utáni helyreállítási folyamattól függ. Ezért, ha minden orvosi ajánlást betartunk, az újrafertőzés veszélye csökkenthető.

A tuberkulózis laboratóriumi diagnózisa

A tuberkulózis olyan betegség, amely könnyen diagnosztizálható a modern körülmények között és a tudományos eredményekben. A tuberkulózis laboratóriumi diagnózisa központi szerepet játszik más diagnosztikai módszereknél, csak a röntgensugaras kutatási módszerek mellett.

Klinikai vérvizsgálat

A tuberkulózisban szenvedő betegeknél a vér általános analízisében bekövetkező változások nem patognomonikusak. A tuberkulózis korlátozott és inaktív formáival a vörösvérsejt normális mennyiségben hipokróm. Amikor hatalmas beszűrődés vagy sajtos tüdőgyulladás, míg prevalenciája sajtos nyirokcsomó-specifikus bélrendszeri bántalmak, valamint a nagy tüdő vagy a posztoperatív vérzés és tudomásul erythropenia microcytosis, oligohromaziyu, polihromaziyu. A makrocitózis, különösen a poikilotsitoz kevésbé gyakran találkoznak, általában súlyos vérszegénységgel. Retikulociták száma lépésben tuberculosis kompenzált tartományok 0,1-0,6%, a subcompensated - 0,6-1,0%, és 1% jellemzi dekompenzált retikulociták.

Amikor a tuberkulózis bizonyos esetekben előfordulhat, hogy egy mérsékelt leukocytosis (akár 15 ezer leukociták.), Kevesebb sugárzást, amelyek előfordulnak 2-7% betegek korlátozott és egyszerű folyamat előforduló formájában és 12,5% - roncsolásos és progresszív tüdő tuberkulózis.

A leggyakoribb eltolódások a leukocyta képletben fordulnak elő. Jelölje meg mind a relatív, mind a abszolút neutrofilit, a leukocita formula mérsékelt eltolódását balra a promyelociták előtt. A myelocyták nagyon ritkák a nem szövődményes tuberkulózis esetén. Számának növelése neutrofil rendellenes gabona vérkép TBC-s betegek mindig jelzi az az eljárás időtartama: súlyos tuberkulózis szinte minden neutrofil tartalmaz kóros gabonát. Amikor a tuberkulózis kitörése megszűnik, a nukleáris eltolódás viszonylag gyorsan közeledik a normálishoz. A neutrofilek kóros granularitása általában hosszabb, mint a hemogram más változásai.

A tartalom az eozinofil sejtek a perifériás vérben is függ a folyamat és a fázis allergiás állapot organizmus. Számuk addig csökken, amíg aneozinofiliya súlyos és tartós betegség kitörése, és fordítva, növekszik a reszorpciós beszűrődését és mellhártyaizzadmány, valamint a korai formái primer tuberkulózisban.

Az elsődleges tuberkulózis legtöbb formáját lymphopenia kíséri, amelyet néha évek óta megfigyelnek, még bizonyos változások hegesedését követően is. A másodlagos tuberkulózis a súlyosbodás fázisában a folyamat súlyosságától függően normális számú limfocitával vagy lymphopeniával járhat együtt.

Ez különleges helyet foglal el meghatározó vörösvértest-süllyedés további vizsgálatok értékelésére gümőkóros folyamat (ESR), amelynek értéke mozgásának értékelésénél tuberculosis folyamatot, és azonosítja az aktív formában. Növekedése ESR jelenlétét jelzi a kóros folyamat (a fertőző-gyulladásos, gennyes szeptikus, hemoblastosis, Hodgkin és mtsai.), És jelzi annak súlyosságától, de a normál szintek ESR nem mindig hiányát jelzi patológia. Gyorsítását vérsejtsüllyedés hozzájárulnak emelkedik a vér szintje globulinok, fibrinogén, a koleszterin, és csökkenti a vér viszkozitását. Lassú vérsejtsüllyedés jellemző járó állapotok hemokoncentrációt, tartalom növekedésével az albumin és az epesavak.

A tuberkulózisban szenvedő betegek hemogrammája a kezelés alatt megváltozik. A hematológiai eltolódások eltűnnek, annál gyorsabban, annál sikeresebb a terápiás beavatkozás. Mindazonáltal figyelembe kell venni a különböző antibakteriális szerek hemopoezisére gyakorolt ​​hatását. Gyakran okoznak eosinophilia, bizonyos esetekben - leukocytosist, leukopenia és gyakran akár agranulocitózis és limfoid retikuláris reakciót. Szisztematikus hematológiai kontroll és helyes adatok elemzésén nélkülözhetetlenek a klinikai állapot kiértékelése céljából a beteg, és a folyamat hatékonyságának dinamikájának alkalmazott kezelést.

A vizelet klinikai vizsgálata

A vizeletrendszer tuberkulózisával a vizeletvizsgálat a fő laboratóriumi diagnosztikai módszer. Meg lehet nézni leukocyturia, eritrotsiturii, proteinuria, gipoizostenuriyu, mikobakteriuriyu tuberkulózis, specifikus bacteriuria.

Leukocyturiában - a leggyakoribb tünet a tuberkulózis a húgyutak, a kemoterápia előtt és nincs külön, csak kivételes esetekben, mint a teljes elzáródását lumen a húgyvezeték. Nyecsiporenko teszt (meghatározása leukociták számának 1 ml vizelet) segít objektívebben mértékének értékelésére leukocyturia nefrotuberkuloze az, és bizonyos esetekben az azonosítást normál vizeletvizsgálat. Azonban nem szabad elfelejtenünk, hogy leykotsitouriya lehet akut és krónikus pyelonephritis, cystitis, húgycsőgyulladás, kövek a vesékben és húgyvezetékekben.

Eritrotsiturii. valamint a leukocyturia. az urogenitális rendszer tuberkulózisának egyik leggyakoribb laboratóriumi jele. A hematuria gyakorisága a folyamat előfordulási gyakoriságától függ, és nő a veseben a destruktív tuberkulózis kialakulása. A leukocyturia nélküli eritrocituria tipikusabb a vese tuberkulózis korai szakaszában. A leukocyturia fölött uralkodó hematuria fontos érv a vese tuberkulózis javára a nemspecifikus pyelonephritisben való megkülönböztetésében.

Biokémiai vérvizsgálat

A tuberkulózissal a biokémiai paraméterek megváltozása elsősorban a folyamat fázisában, a szövődményekben és a különböző egyidejű betegségekben múlik. A tüdő és más szervek inaktív tuberkulózisában szenvedő betegeknél a vérszérum teljes fehérje és fehérje frakciói változatlanok és meghatározzák a normál tartalmat.

A betegség akut formáiban, valamint a tuberkulózis krónikus formáinak súlyosbodásával és progressziójával az albumin-globulin koefficiens csökken.

Alapvető értékelése funkcionális állapota szervi károsodás és a máj a tuberkulózis és szövődményei a meghatározása szérum össz-és direkt bilirubin, AST (ACT), alanin-aminotranszferáz (ALT). Az aminotranszferázok szintjének dinamikus meghatározása. bilirubin a tuberkulózis kezelésére a betegek, különösen a súlyos formák, - kötelező eleme a biokémiai vizsgálata tuberkulózisban és zajlik havonta.

A vesék funkcionális állapotának vizsgálata magában foglalja a szérum kreatinin meghatározását és a glomeruláris filtrációs ráta kiszámítását a Cockcroft-Gault képlet szerint. A glomeruláris filtrációs ráta kiszámítása Reberg minta alkalmazásával kevésbé pontos eredményeket ad.

A tuberkulózisos betegek dinamikus biokémiai vizsgálatának fő célja az eljárás lefolyásának nyomon követése, a gyógyszerek mellékhatásainak időben történő felismerése és a keletkező homeosztatikus rendellenességek megfelelő korrekciója.

A biokémiai vizsgálati módszerek alkalmazása extrapulmonalis tuberculosisban

A leginkább informatív mutató a tuberkulosztearinsav tartalom a biológiai folyadékokban, de meghatározása technikai nehézségekkel jár (a gázkromatográfia és a tömegspektrometria szükségessége).

Ígéretes mérése adenozin-deamináz-aktivitás - olyan enzim meghatározott folyadékok: szinoviális, perikardiális, ascites vagy a gerincvelő. Az adenozin-deamináz fő termelői a limfociták és monociták. Meghatározása adenozin-deamináz-aktivitás biológiai folyadékokban megkönnyíti a diagnózis tuberkulotikus synovitis, a tuberkulózis, a nyirokcsomók, gümőkóros agyhártyagyulladás, tuberkulotikus serozity.

Néhány biokémiai indikátort a nem-specificitásuk miatt csak biológiai folyadékokban határoztak meg, közel a lézió fókuszához. Mérje meg a mutatók szintjét a tuberkulin szubkután vagy intradermális injekciójával szemben (általában 48 órával és 72 órával ezután). Ezt követően a markerszint növelési fokát (% -ban) a kezdeti szinthez viszonyítva számítják ki.

A transzamnidáz szervspecifikus enzim aktivitásának vizelete optimális meghatározása, amelynek megjelenése a különféle természetű vesék hatására jelentkezik. A transzamidináz vizsgálat csak a tuberkulin szubkután injekciójának feltételei alapján indokolt a helyi gyulladásos folyamatok súlyosbodása érdekében. Határozza meg a transzamidin aktivitását a vizeletben kezdetben és 24-72 órával az 50 TE tuberkulin bevezetése után. A fermentáció 2-szeres és nagyobb mértékben történő növelése lehetővé teszi az esetek 82% -ában a vesék aktív tuberkulózisának megkülönböztetését a krónikus pyelonephritis exacerbációjától.

A női nemi szervek tuberkulózisával a vérben lévő haptoglobin és malonsavdialdehid koncentrációját provokációs tuberkulin tesztben állapítják meg. A szubkután injekciózott tuberkulin 50 TE és 72 órával később egy második biokémiai vizsgálatot végzett. Abban az esetben, tuberkulózis etiológiájú mértékben haptoglobinhoz szint növekedése nem kevesebb, mint 28%, és a szint maionsav dialdegi da - 39% vagy több. Az adenozin-deamináz aktivitását a Douglas térből nyert peritoneális folyadékban is meghatározzák. A punctate-t 72 órával a tuberculin intradermális injekciója után, 0,1 TE és 0,01 TE dózisok után vizsgáljuk az elülső hasfal felszínén megjelenő belső nemi szervek vetületére. A tuberkulózis-folyamat javára az adenozin-deamináz aktivitásának növekedése 10% vagy annál nagyobb, mint a kezdeti.

Amikor a szem érintett, megvizsgáljuk az antigén stimulációra adott válaszreakcióban fellépő fókuszreakciót. Nemkívánatos a kifejeződő válasz kialakulása, melyet a vizuális funkciók csökkenése kísér. Minthogy a minimális fókuszreakciók értékelése gyakran nehéz, a következtetés tárgyilagossága érdekében párhuzamosan és a haptoglobin vagy adenozin-deamináz vérszérumban való növekedésének mértékét kell irányítani.

Valamennyi biokémiai vizsgálatot más módszerekkel együtt kell elvégezni.

Véralvadási rendszer kutatás

Relevanciája a kutatási állapotát a véralvadási rendszer TB okozza jelenlétében betegek száma tüdőtuberkulózisban haemoptysishez vagy tüdővérzés, valamint hemokoagulációs komplikációk a sebészi kezelése a tuberkulózis. Ezen kívül természetesen kapcsolódó TB látensen áramló éren hemokoagulációs befolyásolja a betegség lefolyását és a kemoterápia hatékonyságát.

Azoknál a betegeknél, pulmonális TBC prevalenciája a váladékos gyulladás eleme a megfigyelt csökkenése a vérben antikoaguláns aktivitását. A betegek alacsony prevalenciája adott lézió a tüdőben túlnyomórészt produktív hemokoagulációs intravaszkuláris gyulladásos komponenst kifejezve enyhén. Azoknál a betegeknél, pulmonalis tuberculosis hemoptysis és tüdővérzés állapotban véralvadási rendszer más: a betegek alacsony vérveszteség a magassága gemoptoe vagy közvetlenül annak lejárta után van egy éles növekedést véralvadási képesség miatt súlyos intenzívebbé trombinoobrazovaniya miközben megnövekedett „szerkezeti” alvadási. Azoknál a betegeknél, masszív vérveszteség megfigyelt csökkenése alvadási potenciális rovására koncentrációjának csökkentésére fibrinogén. A XIII faktor aktivitása, a vérlemezkeszám. A szakaszában sebészeti kezelés betegeknél korlátozott formában tüdőtuberkulózis jelentős megsértése rendszerrel homeosztázis bekövetkezik. Betegek elterjedt eljárás végrehajtása során a pnevmon- vagy plevropnevmonektomii gyakran alakul DIC, amelyek formája lehet a „második betegség.”

Figyelemmel kísérni az állami véralvadás betegekben tüdőtuberkulózisban kell végezni meghatározását az aktivált parciális tromboplasztin idő (aPTT), fibrinogén, trombin idő, protrombin index és a vérzési idő és a véralvadási időt.

Hormonális kutatás

Újabb kísérleti és klinikai megfigyelések arra utalnak, jelenlétében hormonális állapot változása egy adott gümőkóros pneumonia. Bizonyított, hogy a korrekció a zavar a hipofízis-mellékvese, agyalapi mirigy-pajzsmirigy rendszerek és a hasnyálmirigy működését együtt az anti-TB kezelés hozzájárul a aktiválását fibrogenezis és javítási egy lókusz specifikus gyulladás.

A hipofízis-pajzsmirigy-rendszer funkcionális állapotát a vérben levő triiodotironin (T3), tiroxin (T4), egy agyalapi mirigy testének (TTG) pajzsmirigy-stimuláló hormonja. Azt találtuk, hogy a szubklinikai hypothyreosis észlelünk 38-45% a betegek tüdő tuberkulózis, és a legtöbb gyakran diagnosztizálnak disszeminált és fibro-barlangos formák folyamatot. Ugyanazokkal a formákkal, mint a T3,és T4, és ezeknek a hormonoknak az egyensúlya a T arány növekedése formájában van4/ Ts.

Mellékvesekéreg funkció értékeli a kortizol szintjét a vérszérumban, és endokrin funkciója a hasnyálmirigy - koncentrációja immunreaktív inzulin. Az akut fázisban a fertőzés növeli, hogy az endogén kortizol és inzulin. A hiperinzulinémia is fel van tüntetve a test szöveti inzulinrezisztencia, ami jellemző a bármely aktív gyulladásos folyamat, különösen a specifikus. Meghatározása glyukokortiko idnoy-mellékvese funkció aktív tüdőtuberkulózisban jelenlétét mutatja Cushing a legtöbb betegnél. Normál kortizol szintjeit vérkoncentráció a beteg fertőző gyulladás akut időszakban kell tekinteni viszonylagos kudarcát glükokortikoid funkciója a mellékvese kéreg, amely alapjául szolgálhat tartására adagok megfelelő terápia a glükokortikoidok.

Közel egyharmada betegek tüdőtuberkulózisban lehet megállapítani, hogy a szint Ince-lin meglehetősen alacsony, és közel a normál tartomány alsó szintje, míg a 13-20% tapasztalt jelentős hyperinsulinémia. Mivel a relatív hipo- és hiperinzulinizmus magas-kockázati tényezők a fejlesztési szénhidrát-anyagcsere rendellenességek különböző súlyosságú. Ezek a változások a funkcionális aktivitásának hasnyálmirigy B-sejtek igénylik a rendszeres vércukorszint monitorozást tuberkulózisban és időben diabétesz megelőzésében. Ezen kívül. ez további logikája használata fiziológiás dózisú inzulin a tuberkulózis kezelésére.

Általában az alacsonyabb szintek a pajzsmirigy hormonok és egyensúlytalanság hiperkortizolémia és hiperinzulinizmus legnagyobb REACH súlyos során gümőkóros folyamat, kiterjedt tüdőkárosodás és súlyos tuberkulózis tünetei mérgezés.

A tuberkulózis mikrobiológiai diagnózisa

Mikrobiológiai vizsgálatok szükségesek, hogy azonosítsák a tuberkulózisban, ellenőrzését a diagnózist, a monitoring és a kemoterápia korrekció értékelő kezelési eredmény, más szóval, mivel a regisztráció a beteg tuberkulózis mielőtt eltávolítaná a Registry.

Minden epidemiológiai program és projekt a bakteriális excretorok számának értékelésén alapul, ami nem végezhető laboratóriumi módszerek alkalmazása nélkül a mycobaktériumok tuberkulózisának kimutatására. Az úgynevezett szervezett lakosság felmérésében a bakteriális behatolók aránya elérte a 70-et vagy annál többet, ami a laboratóriumi módszerek számára elegendően hatékony módszert jelent a tuberkulózis-betegek azonosítására ebben a populációcsoportban.

A tuberkulózis diagnosztikájának hagyományos mikrobiológiai módszerei bakterioszkópiás és kulturális vizsgálatok. A modern módszerek a mycobacterium tuberculosis automatizált rendszerekben történő termesztését, a PCR meghatározását tekintik. Mindazonáltal ezek a módszerek szükségszerűen kombinálódnak a klasszikus bakteriológiai módszerekkel.

Diagnosztikai anyaggyűjtemény

A laboratóriumi vizsgálatok hatékonysága nagymértékben függ a diagnosztikai anyag minőségétől. A diagnosztikai anyagok gyűjtésére, tárolására és szállítására vonatkozó szabályok betartása és a betegértékelési algoritmus pontos végrehajtása közvetlenül befolyásolja az eredményeket és biztosítja a biológiai biztonságot.

A tuberkulózis vizsgálata során különféle anyagokat használnak. Annak a ténynek köszönhetően, hogy a TB logkih- leggyakoribb formája tuberkulózis léziók, az alapanyag kutatási fontolóra köpet és más típusú levehető tracheobronchialis: felső légúti váladék után kapott aeroszol inhalációs: bronchiális mosófolyadékot; bronchoalveolar öblítés; kapott anyag bronchoscopia, és intrapulmonáris transztracheáiis biopsziák: hörgőaspirátumok, gége tamponokat, a váladékok a sebek és kenetek al.

A kutatás hatékonysága fokozódik, ha a páciensből származó anyag ellenőrzött gyűjtése történik. Ebből a célból speciálisan felszerelt helyiséget vagy speciális fülkét vásárolnak. Az anyaggyűjtés veszélyes eljárás, ezért anyagot kell gyűjteni a kutatásra vonatkozóan, figyelembe véve a fertőző biztonság szabályait.

A mycobacterium tuberculosis tesztelésére szolgáló anyagot steril palackokban kell összegyűjteni szorosan csavarozott kupakkal, hogy megakadályozzák a környezet szennyeződését és megvédjék az összegyűjtött anyagot a szennyezettségtől.

A diagnosztikai anyaggyűjtő injekciós üvegeknek a következő követelményeknek kell megfelelniük:

  • ütésálló anyagból kell készülni;
  • könnyen olvad az autoklávozás során;
  • legyen elegendő térfogata (40-50 ml):
  • széles nyílással rendelkezzen a köpet összegyűjtésére (átmérő nem kevesebb, mint 30 mm);
  • könnyen kezelhető, átlátszó vagy áttetsző, hogy felmérje a minta mennyisége és minősége a fedél kinyitása nélkül.

Az optimális kutatási eredmények eléréséhez a következő feltételeket kell figyelembe venni:

  • Gyűjtse össze az anyagot a kemoterápia megkezdése előtt;
  • a vizsgálathoz szükséges anyagokat az élelmiszerek és gyógyszerek reggeli bevitele előtt kell összegyűjteni;
  • a kutatáshoz kívánatos, hogy legalább 3 reggeli vértestet gyűjtsünk. Összegyűjtse a köpetet 3 egymást követő napon;
  • az összegyűjtött anyagot a lehető leghamarabb el kell juttatni a laboratóriumba:
  • abban az esetben, ha az anyagot a laboratóriumba azonnal lehetetlen szállítani, a hűtőszekrényben 4 ° C-os levegő hőmérsékleten, legfeljebb 48 órán keresztül tárolják;
  • Az anyag szállítása során szorosan figyelni kell az injekciós üvegek integritását.

A helyesen gyűjtött köpet a nyálkahártya vagy a nyálkahártya. A vizsgált köpet optimális térfogata 3-5 ml.

A köpetet orvosi felügyelet mellett gyűjtik össze. A köpetbegyűjtésért felelős személyeknek bizonyos szabályok végrehajtását kell követniük:

  • meg kell magyarázni a betegnek a vizsgálat célját és annak szükségességét, hogy ne köhesse meg a nyálat vagy a nasopharyngeális nyálkat, hanem a mély légúti traktus tartalmát. Ez elérhetõ egy olyan produktív köhögés következtében, amely több (2-3) mély lélegzet után jelentkezik. Szintén figyelmeztetni kell a pácienst, hogy ki kell öblítenie a száját felforrósított vízzel, hogy eltávolítsa a szájüregben növekvő mikroflórák fő részét, és az ételmaradványokat, amelyek megakadályozzák a köpet eltávolítását;
  • a köpetgyűjtésben részt vevő orvosnak, a fürdőköpeny és a kalap mellett, maszkot, gumikesztyűt és gumi kötényt kell viselnie;
  • a páciens mögött állva javasoljuk, hogy a palackot a lehető legközelebb tartsa az ajkához, és azonnal szétválasztja a váladékot, mivel köhög, és biztosítani kell, hogy a légáramlás az egészségügyi dolgozótól távolodik:
  • A köpetgyűjtés befejezésekor az egészségügyi dolgozónak óvatosan zárja le az injekciós üveget fedővel, és értékelje az összegyűjtött köpet mennyiségét és minőségét. Ezután a palackot felcímkézzük, és egy speciális bixbe helyezzük a laboratóriumba való szállításhoz.

Ha a beteg nem termel váladékot, az este és kora reggel a gyűjtés napján az anyag szükséges, hogy adjon neki köptető :. kivonat a gyökerek pillecukor (mukaltin), brómhexin, ambroxol, stb - vagy alkalmazza irritáló inhalációs berendezés használatával helyiségben felszerelt gyűjteni köpet. Az így összegyűjtött anyag nem védett, és a gyűjtés napján meg kell vizsgálni. Annak elkerülése érdekében, hogy "selejtezés" a laboratóriumban az irányba, hogy egy különleges jelet.

Ha nem végeznek mikrobiológiai vizsgálatokat ebben a létesítményben, az összegyűjtött diagnosztikai anyagot központilag kell a laboratóriumba szállítani, feltéve, hogy az anyagot a hűtőszekrényben vagy a tartósítószer használatával történő megőrzés alatt tartják. Szállítson anyagot a laboratóriumba a szállítási dobozokban, amelyek könnyen fertőtleníthetők. Minden mintát fel kell tüntetni a megfelelő címkével, és az egész tételt ki kell tölteni kísérő formanyomtatvánnyal.

A betegek vizsgálatának módja és gyakorisága

A beteg tuberkulózisának kezdeti, ún. Diagnosztikai vizsgálatánál legalább 3 köpetrészt kell megvizsgálni 2 vagy 3 napig. amelyet az orvosi személyzet felügyelete alatt gyűjtöttek össze, ami növeli a mikroszkópia hatékonyságát.

A tuberkulózis elsődleges szűrését az egészségügyi rendszer összes orvosi diagnosztikai intézményének kell elvégeznie. A kezdeti vizsgálat hatékonyságának javítása érdekében a közelmúltban a klinikai diagnosztikai laboratóriumok alapján az úgynevezett mikroszkópos mikroszkópokat modern mikroszkóppal és járványbiztonsági eszközökkel felszerelték.

A tuberkulózis elleni beavatkozások során egy szűrővizsgálatot alkalmaznak, amely magában foglalja a köpetvizsgálatot vagy más diagnosztikai anyagot legalább háromszor 3 napig. A kezelés alatt intenzív kemoterápiás fázisban rendszeresen havonta legalább egyszer mikrobiológiai vizsgálatokat végeznek. A kezelés fázisára való áttérésnél ritkábban végeznek vizsgálatokat - 2-3 hónapos intervallummal, míg a vizsgálat gyakorisága kétszeresére csökken.

Az extrapulmonalis tuberculosis diagnosztikai anyagának gyűjteménye

Feature kórbonctani anyag extrapulmonalis formái TB - Mycobacterium tuberculosis alacsony koncentrációban benne, amely megköveteli a érzékenyebb módszerek mikrobiológiai vizsgálatok, elsősorban a vetés technikák közegben.

A húgyúti rendszer tuberkulózisával a vizelet a leginkább hozzáférhető tanulmányi anyag. A vizeletgyűjtést egy speciálisan képzett nővérnek kell elvégeznie.

A külső nemi szerveket vízzel szappannal vagy gyenge kálium-permanganát oldattal mossuk. A húgycső külső megnyitását gondosan kezelik. Egy steril injekciós üvegben a reggeli vizelet átlagos részét gyűjti össze: férfiaknál, természetesen nőknél, katéter alkalmazásával. A vesemedence vizeletét egy vagy két vesék katéterezésével steril kémcsövekben gyűjtik össze, ez utóbbi esetben - feltétlenül minden víztől elkülönítve. A vizelet kis mennyiségét centrifugáljuk, az üledéket megvizsgáljuk.

A férfiakban, a spermiumban, a nyálkahártyákat, a prosztata titkát centrifugálásnak vetjük alá, hogy csapadékot kapjunk. A férfiak genitális területének specifikus folyamatának bármely lokalizációjával a prosztata masszázs elősegítheti a mycobacterium tuberculosis tartalmú váladékok szekrécióját.

A nőkben a menstruációs vér összegyűjtése szúrással vagy Kafka sapkával történik. A kapott anyagot vörösvérsejtekből szabadítják fel, desztillált vízzel mosva, majd centrifugálással. A csapadékot megvizsgáljuk.

A méh nyaki csatornájából való allokációkat Kafka kapacitásában vagy sapkájában gyűjtik össze, vagyis kívánatos 1-2 ml kórokozó anyagot felhalmozni.

A vesék, nemi szervek operatív beavatkozásaiból nyert anyagok. biopsziákkal, kapszulákkal az endometriumból, homogenizálódnak. Ehhez steril habarcsot kell elhelyezni, és steril ollóval alaposan összetörni. Ehhez a szuszpenzióhoz hozzáadunk steril folyami homok mennyisége egyenlő annak tömegével, majd feltöltjük a 0,5-1.0 ml izotóniás nátrium-klorid-oldattal, és minden trituráltuk, amíg pasztaszerű masszát azzal a kiegészítéssel, izotóniás nátrium-klorid-oldatot (4-5 ml). Ezután a tömeget 1-1,5 percig hagyjuk ülepedni, a felülúszót megvizsgáljuk.

A csontok és az ízületek tuberkulózisa. A steril fecskendővel kapott punctátumot (tályogpor) steril edényekbe helyezzük, és azonnal a laboratóriumba szállítjuk. A steril pipettát, amelyet előzőleg steril izotóniás nátrium-klorid-oldattal nedvesítettek, 2-5 ml injekciót adjon át, átvinjen egy palack gyöngyökre és további 2-3 ml izotóniás nátrium-klorid-oldatot adjon hozzá. Az üveget parafával lezárják, és 8-10 percig rázogatják a vadászgépben. A homogenizált szuszpenziót megvizsgáljuk.

Az osteoarticularis tuberkulózis fistuláris formáin a fistulából származó gennyet vesznek. A bőséges ürítés közvetlenül egy kémcsőbe kerül. Azokban az esetekben, sovány ínysorvadás sipoly mossuk steril, izotóniás nátrium-klorid-oldattal, és a mosófolyadékot összegyűjtöttük egy kémcsőbe, vagy a darab impregnált tampon genny elemzésre elküldeni.

Sebészeti kapott anyagot a műtét során a csontok és ízületek állhat gennyes-nekrotikus tömegek, granulátumok, heg, csontszövet ízületi hártyában és az egyéb szubsztrátok. A kezelést, mint a vesék tuberkulózisában végzik.

A szinoviális folyadék mikrobiológiai vizsgálata 3% -os nátrium-citrát-oldatban (1: 1 arány) a koaguláció megelőzésére közvetlenül a lyukasztás után történik.

A nyirokcsomók tuberkulózisa. A nyirokcsomók puncturálása során kivont gént szintén megvizsgáljuk. mint a tályogok. A műtéti beavatkozások során nyert nyirokcsomók szöveteit, a biopsziákat, a tuberkulózis egyéb formáihoz hasonlóan vizsgálják.

A mycobacterium tuberculosis széklet tömegének vizsgálata rendkívül ritka, a pozitív eredmények szinte teljes hiánya miatt.

Mikobaktériumok mikroszkópos vizsgálata

A köpetmikroszkópia viszonylag gyors, egyszerű és olcsó módszer, amelyet minden esetben gyaníthatóan tuberkulózissal kell alkalmazni. Ezenkívül ez a vizsgálat a kemoterápia hatékonyságának értékelésére és a kezelés helyreállítására vagy meghibásodására utal, ha nincs tenyésztési vizsgálat.

Kétféle mikroszkópos vizsgálati módszert alkalmaznak:

  • közvetlen mikroszkópos módszer, ha a kenet közvetlenül a diagnosztikai anyagból készül;
  • a dekontamináns kezelt anyagból készített üledék mikroszkópos vizsgálata tenyésztésre.

Az első módszert azon laboratóriumokban alkalmazzák, ahol csak mikroszkópos vizsgálatokat végeznek (az általános orvosi hálózat klinikai és diagnosztikai laboratóriuma).

A mikroszkópos vizsgálat legjobb eredményeit a diagnosztikai anyag (például centrifugálással) koncentrálásával nyerik.

A mikroszkópos vizsgálat során a mycobacterium tuberculosis 50% -os valószínűséggel történő kimutatásához 1 ml köpetnek több mint 5000 mikrobás sejtet kell tartalmaznia. A tuberkulózis tüdőformáiban szenvedő betegek köpetében általában jelentős mennyiségű savas baktérium található, amely lehetővé teszi számukra, hogy a bakterioszkópia megbízhatóan kimutatható legyen. Ennek a módszernek a diagnosztikus érzékenysége javítható egy páciens több köpetmintájának vizsgálatával. A bakterioszkópos vizsgálat negatív eredményei nem zárják ki a tuberkulózis diagnózisát, mivel egyes betegek köpetében kevesebb mikobaktérium található, mint mikroszkópos vizsgálattal. A köpet kimutatásának gyenge előkészítése a bakterioszkópos vizsgálat negatív eredményét is okozhatja.

A savas gyors mycobacteriumok kimutatásának legáltalánosabb módszere a kenetben Tsiol-Nelsen szerint. Az eljárás alapja a karbolikus fuzin mikrobiális sejtbe való behatolása egy membránon keresztül, amely viaszos lipidréteget tartalmaz, miközben a fenol fűtött és erős marató hatású. A kenet kései 25% -os kénsavval vagy 3% -os sósavoldattal való elszíneződése az összes nem saválló szerkezet elszíneződéséhez vezet. A kenet elszíneződött elemeit 0,3% metilénkék-oldattal festjük. A mycobacteriumok nem érzékelik a szokásos anilin színezékeket, aminek következtében a savas gyors mikobaktériumok karmazsinvörösre festenek, és más mikrobák és sejtek - kék színűek.

A festett keneteken által Ziehl-Nelsenu használni fényt binokuláris mikroszkóp immerziós objektívvel (90- vagy 100-szeres növekedés), és a szemlencsét a 7- vagy 10-szeres nagyítással. Fedezze fel a 100 látómezők, amely elegendő kimutatására mycobacteriumok a kenetben egységben. Ebben az esetben, ha az E tanulmány eredménye negatív, hogy erősítse meg a javasolt részletek 200 látómezők. Rögzítse az eredményeket, feltüntetve a száma detektált saválló bacilusok (AFB).

Ezen technika mellett színes fluorokrómokat használnak a lumineszcens mikroszkópiához, amely lehetővé teszi a legjobb eredmény elérését. Ennek a módszernek a használata 10-15% -kal növeli a mikroszkóp hatékonyságát. Amikor a mycobacteriumokat lumineszcens színezékekkel (auramine, rodamine stb.) Kezelik, ezek az anyagok a mikrobás sejt viaszszerű szerkezetéhez is kötődnek. Amikor a színes sejteket izgalmas fényforrással sugározzuk (az ultraibolya sugárzás egy bizonyos spektruma), narancssárga vagy élénkvörös fényt sugároznak fekete vagy sötét zöld háttéren. A látható kép nagy fényereje és kontrasztja miatt a mikroszkóp általános nagyítása 4-10-szeresére csökkenthető, a látószög megnő és a készítmény megtekintési ideje csökken. Ezzel együtt, a sokkal nagyobb mélységélesség miatt növelheti a tanulmány kényelmét.

Ha fluoreszcens mikroszkópos vizsgálatot végeznek ugyanazon a területen, akkor a kenet jelentősen kevesebb időt vesz igénybe, mint a Tsiol-Nelsen festés fénymikroszkópos vizsgálata. Ha egy munkanapon egy mikroszkóp kb. 20-25 ilyen kenetet vizsgál meg, majd fluoreszcens mikroszkóppal egyszerre több mint 60-80 mintát vizsgál meg. A tapasztalt mikroszkópusok tudják, hogy az auramin és a rodamin keverékében a sejtek színezése bizonyos szempontból specifikus a savas gyors bacillusok számára, ami ebben az esetben aranyszínű botoknak tűnik. A saprofiták zöldes színűek.

Egy másik fontos előnye a módszernek a fluoreszcens mikroszkóp - képes érzékelni megváltozott Mycobacterium, elveszett hatása alatt kedvezőtlen tényezők, beleértve az intenzív kemoterápia, kislotousotoychivosti tulajdon, és nem detektálható ezzel kapcsolatban festéssel Ziehl-Nelsenu.

A fluoreszcens mikroszkópos módszer hátrányai közé tartozik a mikroszkóp viszonylag magas költsége és működése. Mindazonáltal központosított vagy más nagy laboratóriumokban, ahol a terhelés meghaladja a három hagyományos mikroszkóp segítségével működő laboratóriumi technikus normáját, olcsóbb egy fluoreszcens mikroszkópot használni.

A bakterioszkópos módszerek meglehetősen magas fajlagossággal rendelkeznek (89-100%). A mikroszkópos módszerrel nyert pozitív eredmények körülbelül 97% -át egyértelmûen igazolja a vetés eredménye.

Meg kell jegyezni, hogy a mikroszkopikus vizsgálata kenetek patológiás anyag nem tudja azonosítani a faj saválló bacilusok észlelt. mikroszkópos módszer lehetővé teszi, hogy véleményt csak a jelenléte vagy hiánya sav előállítására mikroorganizmusok, ami azzal magyarázható, a létezése a természetben számos morfológiailag hasonló tuberkulotikus mycobacteriumok komplex nontubercular saválló mikroorganizmusokat.

A mikroszkópos eredményeket félkvantitatív egységekben értékeljük.

Annak érdekében, hogy össze lehessen hasonlítani az eredményeket a különböző mikroszkópos módszerek, empirikus együtthatók adjuk. Például, hogy hasonlítsa össze az eredményeket a festett keneteken fluoreszcens festékekkel, az adatok kutatási fénymikroszkóp (1000-szoros nagyításban), meg kell osztani a számát saválló bacilusok által észlelt fluoreszcens mikroszkóp, a megfelelő együttható 250-szeres nagyítás - a 10, 450-szeres - 4-re, 630-szorosra - 2-re.

Az extrapulmonáris tuberkulózis mikroszkópos vizsgálata

Közvetlen mikroszkópiát végzünk, valamint a dúsítás után elkészített kenetek mikroszkópját, majd Tsiol-Nelsen festést vagy lumineszcens festékeket. A kenetek közvetlen mikroszkópos vizsgálata hatástalan az anyagban lévő alacsony koncentrációjú mycobacteriumok miatt, ezért ésszerűbb a dúsítás módszereinek használata. A leghatékonyabb a centrifugálás. Ha a biológiai anyag viszkózus, az anyag egyidejű homogenizálásával és cseppfolyósításával centrifugálást alkalmaznak, amelyet 3000 g-os centrifugáló erővel és hipokloritos oldatokkal végzünk nagy sebességű centrifugák alkalmazásával. A dúsítás egyéb módszerei, mint például a mikro-flotáció, jelenleg nem használatosak biológiailag veszélyes aeroszolok kialakulása miatt.

A tuberkulózis diagnózisának kulturális módszere

A vetés módja vagy a tenyésztési módszer érzékenyebb, mint a kenet mikroszkópiája, és számos előnye van az utóbbiaknál. Ez lehetővé teszi több tucat életképes mikobaktérium kimutatását a vizsgálati anyagban, és nagy diagnosztikai értékkel bír. Ez különösen fontos az újonnan diagnosztizált vagy kezelt betegek anyagának vizsgálatakor, akik kis mennyiségű mycobacteriumot bocsátanak ki.

A mikroszkópos vizsgálathoz képest a kultúra kutatások lehetővé teszik a 15-25% -nál nagyobb mértékben diagnosztizált tuberculosis betegek számának növelését, valamint a tuberkulózis korábbi szakaszokban történő igazolását, amikor a betegség még mindig kezelhető. A tenyésztési vizsgálat nagyon fontos előnye a gerjesztő tenyészet megszerzésének lehetősége, amely azonosítható és tanulmányozható a gyógyszerérzékenység, a virulencia és más biológiai tulajdonságok tekintetében.

A termesztési módszerek hátrányai közé tartoznak az időtartamuk (az anyagok várakozási ideje eléri a 10 hetet). magasabb költség, a diagnosztikai anyag feldolgozásának összetettsége.

A diagnosztikai anyag kezelésének alapelvei

A hagyományos mikrobiológiai módszerek nem alkalmazhatók tuberkulózisra vonatkozó vizsgálatok elvégzésére. Ez annak köszönhető. hogy a mycobacterium tuberculosis nagyon lassan növekszik, és a legtöbb klinikai minta gyorsan növekvő pyogén és rothadó mikroorganizmusokat, gombákat tartalmaz. Gyors növekedésük a gazdag tápközegben a mycobacteriumok kifejlődését gátolja, és nem teszi lehetővé a tuberkulózis kórokozójának izolálását, így a diagnosztikai anyagot elő kell vetni a vetés előtt. Ezenkívül a páciens légutakból felszabaduló mikobaktériumokat általában nagy mennyiségű nyálka veszi körül, ami megnehezíti a koncentrálást. E tekintetben, a köpet és más hasonló anyagok ültetése előtt, cseppfolyósításukra szükség van a dekontaminálásra.

Minden mosó- és szennyezésmentesítő vannak kisebb vagy nagyobb súlyos toxikus hatást gyakorolnak mycobaktériumok. A feldolgozás eredményeképpen a mycobacteriumok akár 90% -a is meghal. Annak érdekében, hogy elég a mikobakteriális lakosság, megkímélve annak szükségességét, hogy feldolgozási technikák, amelyek lehetővé teszik, egyrészt, hogy elnyomja a gyorsan növekvő gennykeltő baktériumok és büdös, és a másik -, hogy megőrizze életképességét mikobaktériumok jelen az anyagban.

Attól függően, hogy az anyag, a homogenitás fokát, és a szennyezés előtti feldolgozás segítségével különböző mentesítő: köpet - 4% -os nátrium-hidroxid-oldattal, oldatok trohzameschonnogo nátrium-foszfát 10%, a benzalkónium-klorid, trinátrium-foszfát, NALC-NaOH (N-acetil-L-cisztein nátrium-hidroxid) jelenlétében, a végső koncentráció 1% nátrium-hidroxid, a vizelet és más folyékony anyagok - kénsav oldat 3%, a szennyezett minták, zsír-tartalmú anyagok - oxálsav-oldattal és 5%. Ezenkívül bizonyos esetekben enzimeket, felületaktív anyagokat (detergenseket) használnak. Alkalmazás Tween detergensek és néhány más mikobakteriális halál kíséri kevésbé sejtek (40-50% túlélni). Azonban csak folyékony anyagokhoz használhatók. A világ legnagyobb eloszlása ​​a NALC-NaOH volt. készletekben. Ez a módszer lehetővé teszi, hogy fordítsanak több mint 85% -át a lakosság mikobaktériumok sejteket. Dekontaminálási tkanesoderzhaschih szilárd nehezebb kitalálni, mert a mértéke az anyag szétszóródása homogenizálás során nehéz. Például, kezelésére biopsziák a nyirokcsomók gyakran kíséri fokozott gyakorisága szennyeződés idegen növények. Ebben az esetben 1% etónium használható.

A nem homogén anyagot üveggyöngyökkel homogenizáljuk dekontaminánsok jelenlétében. A folyékony anyagokat elő-centrifugáljuk, és csak a csapadékot kezeljük.

Vetési és inkubációs technikák

Az előkezelést követően az anyagot centrifugáljuk, ezáltal kicsapjuk a mikobaktériumokat, és növeljük az üledék tartalmát ("iszap-dúsítás"). A kapott csapadékot semlegesítjük és beoltjuk (beoltjuk) sűrű tápközeggel vagy folyékony (félig) táptalajjal ellátott csövekkel. Az üledék többi részéből a kenetek mikroszkópos vizsgálat céljából készülnek. A vetési eljárásnak meg kell akadályoznia a diagnosztikai anyag keresztszennyeződését.

A mikrobiológiai vizsgálat eredményeinek megbízható klinikai értelmezéséhez a következő szabályt kell figyelembe venni: a mikroszkópos és a tenyésztési vizsgálatokat párhuzamosan kell elvégezni a diagnosztikai anyag ugyanazon mintáján.

A beoltott csöveket egy termosztátba helyeztük 37 ° C-on 2 napig vízszintes helyzetben. Ez biztosítja az anyag egyenletesebb felszívódását a tápközegbe. 2 nap elteltével a csöveket függőleges helyzetbe helyezzük és gumi vagy szilikondugóval hermetikusan lezárjuk, hogy megakadályozzuk a vetett közeg szárítását.

A terményeket 37 ° C hőmérsékleten tartják termosztátban 10-12 héten keresztül, rendszeres heti megtekintéssel. Az egyes előnézeteknél a következő paraméterek kerülnek rögzítésre:

  • a vetésnövekedés napjától vizuálisan megfigyelt időszak;
  • növekedési ráta (CFU-k száma);
  • a növény idegen mikrobiológiai növényekkel vagy gombákkal való szennyeződése (ilyen csövek eltávolítása);
  • a látható növekedés hiánya. A csövek a termosztátban maradnak a következő megjelenésig.

Tápanyag

A mycobacteriumok termesztésére különféle tápanyagokat használnak; sűrű, félfolyékony, folyékony. Azonban egyik ismert tápközeg sem rendelkezik tulajdonságokkal, amelyek biztosítják a mycobacterium sejtek növekedését. Ennek kapcsán javasoljuk, hogy a különböző összetételű tápközegeket egyidejűleg használják a hatékonyság növelése érdekében.

A WHO a Levenstein-Jensen környezetet ajánlja a tuberkulózis kórokozójának elsődleges elkülönítésének és a gyógyszerérzékenység meghatározásának szabványos közegeként. Ez egy sűrű tojás környezet, amelyen a mycobacteriumok növekedését a bakterioszkópikusan pozitív anyag beültetése után 20-25. Napon érik el. A bakterioszkóposan negatív növények termése hosszabb inkubációs időt igényel (legfeljebb 10-12 hétig).

Hazánkban a javasolt E.R. Finn tojás környezet Finn-II. Ez abban különbözik, hogy az L-aszparagin helyett nátrium-glutamátot használ, ami a mycobacteriumok aminosavainak szintetizálására más módokat indít el. Növekedés jelenik meg eközegben kissé korábban, és a mycobacteriumok elosztásának gyakorisága 6-8% -kal magasabb, mint a Lowenstein-Jensen tápközegben.

Ahhoz, hogy a hatékonyság növelése a bakteriológiai diagnózis extrapulmonalis tuberkulózis helyénvaló belefoglalni a komplex tápközegekben tápközeg Finn-II. Ahhoz, hogy a növekedés felgyorsítása a tápközeg Finn-II tovább adagoljuk nátrium-tioglikolát 0,05%, csökkentjük az oxigénkoncentrációt. Az enzim védelme céljából a Mycobacterium rendszerek toxikus lipid peroxidációs termékek a tápközegben Finn-II adagolt antioxidáns α-tokoferol-acetát koncentrációja 0,001 mcg / ml. A diagnosztikai anyag vetését szabványos eljárás szerint végezzük.

Az oroszországi tuberkulózis elleni laboratóriumokban a sűrű tápközeg más módosításait alkalmazzák; javasolt G.G. Mordovian táptalaj "New", amelyet V.A. Anic táptalajok A-6 és A-9 stb.

Annak a ténynek köszönhetően, hogy a folyamat a kemoterápia károsíthat számos metabolikus rendszerek mikrobiális sejtek, néhány mycobacterium populáció elveszti azt a képességét, hogy dolgozzon rendesen hagyományos tápközegekben, és előírja, ozmotikusan kiegyensúlyozott (vagy félig-folyékony) táptalajon.

A diagnosztikai anyag vetési eredményeinek értékelése és rögzítése

Egyes törzsek és fajok a mycobacteriumok lassan növekednek, a növekedés még a 90. napig is megjelenhet. Az ilyen növények száma kicsi, de ez lehetővé teszi a növények termesztésben való elviselését 2,5-3 hónapon keresztül.

A mycobacterium tuberculosis virulens kultúrái általában különböző méretű és fajú R-formájú kolóniák sűrű tojás környezetében nőnek. A telepek szárazak, ráncosak, elefántcsontok, enyhén pigmentáltak. Más médiumokban a mycobacterium tuberculosis kolóniája nedves lehet. A kemoterápia folyamán vagy a kezelés alatt sima, nedves növekedésű (S-formájú) telepeket lehet felosztani.

A növények izolálása során speciális tanulmányok sorozatát használják a mycobacterium tuberculosis megkülönböztetésére a nem tuberkulózis mycobacteriumoktól és saválló szaprofitáktól.

A pozitív válasz után adják kötelező mikroszkópos vizsgálata megfestett Ziehl-Nelsenu kenet telepeket. Abban az esetben, a mycobaktériumok növekedését a kenetben felismerni élénkvörös pálca fekvő egyesével vagy csoportosan, alkotó felhalmozódás formájában nemez vagy fonat. Fiatal tenyészetek, különösen izolált hosszú távú kezelés a betegek kemoterápiával, mycobacteriumok különböznek az expresszált polimorfizmus, amíg a jelenléte rúd alakú, valamint a rövid, szinte coccoid vagy hosszúkás változatok, melyek hasonlítanak a micélium.

A mycobacteriumok növekedési ütemét a következő séma mutatja: (+) - 1-20 cfu in vitro (csekély bakteriális kiválasztódás); (++) - 20-100 CFU in vitro (mérsékelt bakteriális kiválasztódás); (+++) -> 100 CFU in vitro (bőséges bakteriális kiválasztódás). A tuberkulózis laboratóriumi diagnózisában nem elégséges annak megállapítása, hogy a mycobacteriumot egy vagy másik módszerrel észlelték-e. részletesen megismertesse a mycobacterial populáció mértékét és jellegét, összetételét és tulajdonságait. Ezek az adatok lehetővé teszik számunkra, hogy helyesen értelmezzük a folyamat állapotát, tervezzünk taktikákat és korrigáljuk a kezelést.

Az utóbbi években a mycobacteriumok növekedésének felgyorsítása érdekében a táptalajokat agar alapon, különböző növekedési adalékokkal és speciális gázkeverék alkalmazásával javasoltak. A mycobacteriumok ezen médiumokon való növekedésének elérése érdekében a termesztés során nagy mennyiségű szén-dioxid (4-7%) atmoszférát hoznak létre. E célból különleges CO2-inkubátorok. Azonban a legfejlettebb automatizált rendszerek a mycobacteriumok termesztésére: MGIT-BACTEC-960 és MB / Bact.

Az egyik ilyen rendszer - MGIT rendszer (mycobaktériumok növekedését jelző cső), arra utal, hogy a magas technológia és a célja a gyors bakteriológiai diagnosztizálására tuberculosis és a Mycobacterium érzékenységet első vonalbeli gyógyszerekkel, és néhány második vonalbeli szerek. Az MGIT a VASTES-960 készülék részeként használja. A mikroorganizmusokat speciális csövekben tenyésztik folyékony táptalajjal a módosított Middlebrook-7H9 táptalajon alapulva. Ahhoz, hogy serkentik a mycobaktériumok növekedését, és elnyomja az idegen mikroflóra növekedési kiegészítők használt növekedési MGIT Growth Supplement, és az elegyet antimikrobiális PANTA.

A mikroorganizmusok növekedését optikailag rögzítjük. A fluoreszcencia alapja, amely akkor következik be, amikor oxigént fogyasztanak a mycobacteriumok a növekedés alatt. Az oxigénfüggő fluorokróm festék egy speciális kémcső alján található, és szilikonnal borított. Szaporodás mikobaktériumok csökkenéséhez vezet a mennyiségű oxigént a csőben, és csökkenti a koncentrációt, amely növekedést okoz a fluoreszcencia, amely láthatóvá válik besugárzás alatt ultraibolya fény által csövek és automatikusan regisztrált fényérzékelő beépített készülék VASTES-960. A lumineszcencia intenzitását növekedési egységekben (GU-növekedési egységek) jegyzik. A növekedési adatokat a számítógép rögzíti, ahol automatikusan menthetők. Számítógépes elemzés növekedési görbék tájékoztatást tudnak nyújtani jelenléte a különböző Mycobacterium medencével, köztük nontubercular, és abban is segít, hogy értékelje a növekedési tulajdonságait mikobaktériumokra.

Ennek eredményeként a megjelenésének időpontját ilyen rendszerek mikobakteriális növekedést jelentősen csökken, átlagosan 11 nappal VASTES-960 és 19 nap MB / Bact, hogy 33 nap a standard szilárd táptalajon. Meg kell jegyezni, hogy ezek a rendszerek magasan képzett személyzetet igényelnek. Vetés anyag folyékony közeget az kíséretében vetés Löwenstein-Jensen táptalajon, a játék szerepe a beugró az esetekben, amikor más média Mycobacterium tuberculosis nem teszik lehetővé a növekedést.

A mycobacteriumok gyógyszerérzékenységének meghatározása

A mycobacteriumok spektrumának és fokozott érzékenységének meghatározása a tuberkulózis elleni gyógyszerek számára nagy klinikai jelentőségű, valamint a tuberkulózis gyógyszeres rezisztencia terjedésének epidemiológiai értékeléséhez. Ezenkívül a kábítószer-rezisztencia nyomon követése lehetővé teszi a tuberkulózis-program egészének hatékonyságának felmérését, amely szerves mutatója a tuberkulózis elleni tevékenységek összes összetevőjének teljesítményének.

A gyógyszerérzékenység többszöröse és időzítése:

  • a kezelés kezdete előtt egyszer a kezelés stratégiájának és taktikájának meghatározására:
  • ha különféle anyagokból (köpet, BAL folyadék, vizelet, exudátumok, likőr stb.) származó beteg kultúrákból izolálunk, akkor minden izolált törzset megvizsgálunk:
  • a kezelés intenzív fázisának végén a klinikai és radiológiai dinamika hiányában:
  • ha a kezelést a következő esetekben módosítani szükséges:
    • a köpet kimutatásának hiánya;
    • a tenyészet újbóli izolálása utána a köpet-negatív;
    • a CMU számának drasztikus emelkedése a tamponban a kezdeti hanyatlás után. Ismeretes, hogy a mycobacterium tuberculosis törzsei, amelyek a gyógyszerérzékenység szempontjából heterogének, izolálják a tuberkulózisban szenvedő beteg anyagából. A törzsek érzékenysége a tuberkulózis elleni szerek esetében a gyógyszer hatókörében, fokozatosságában, gyakoriságában és az ellenállás előfordulásának sebességében különbözhet.

A mértéke gyógyszer-rezisztencia a Mycobacterium tuberculosis-t megfelelően meghatározott kritériumok szerint, amelyek középpontjában a klinikai jelentősége és a stabilitás aktivitásától függ az anti-TB hatóanyag, annak farmakokinetikai, a koncentráció a lézió. a maximális terápiás dózis és így tovább.

A mycobacteriumok gyógyszerérzékenységének meghatározása jelenleg mikrobiológiai módszerekkel történik:

  • Abszolút koncentrációk (hígítási módszer sűrű vagy folyékony táptalajon),
  • arányok,
  • ellenállás együtthatója.

Általában a stabilitás nyilvánul vizuálisan megfigyelhető kolónia növekedési Mycobacterium tuberculosis, de vannak olyan technikák, amelyek indukálják a növekedés korai szakaszában az osztódó sejtekben a Mycobacterium formájában színreakció. Ezek a módszerek rövidítik a vizsgálati időt 3-4-ről 2 hétre.

Mivel egységes Oroszországban bővült, a WHO által ajánlott bizottság kemoterápiás módszer abszolút koncentrációk, ami módszertani szempontból a legegyszerűbb, de megköveteli a nagy pontosságú és szabványosítása laboratóriumi eljárások. A kábítószer-érzékenységi teszt egy tesztcsövekből áll, amelyek TB-ellenes szerekkel módosított tápközeggel rendelkeznek. A készlet áll 2-3 csövek különböző koncentrációjú egyes gyógyszerek használt, egy kontroll cső gyógyszer nélkül, hogy a környezet és az egyik cső, amely 1000 mcg / ml nátrium-Sali tsilovokislogo vagy 500 ug / ml paranitrobenzoynoy sav nontubercular kimutatására mycobaktériumok növekedését.

A késztermékkészlet készítéséhez egy módosított Levenstein-Jensen táptalajt használunk (keményítő nélkül), amelyet lombikba öntünk. Mindegyik lombikban hozzáadjuk az antituberkuloid készítmény megfelelő hígításának megfelelő mennyiségét. A lombik tartalmát alaposan összekeverjük, csövekbe öntjük, és ferde helyzetben, 40 percig 85 ° C-os hőmérsékleten hajtjuk. Javasoljuk, hogy a médiumot automatikus visszacsévélővel automata hőmérsékletszabályozással tekerje. Szerdán anti-TB kábítószerekkel

Az 1-es sorozat a hűtőszekrényben 2-4 ° C-on 1 hónapig tárolható, a második sor készítésére - legfeljebb 2 hétig. A médiumok szobahőmérsékleten történő előkészítésével történő tárolása elfogadhatatlan. A tuberkulózis elleni szerek oldatainak elkészítésekor figyelembe veszik azok aktivitását, kiszámítva a készítmény nem specifikus részének molekulatömegére, a tisztaságra stb. Beállított koncentrációt. A gyógyszerérzékenység meghatározásához csak kémiailag tiszta anyagokat használnak.

A módszer elve az antituberkuluszos gyógyszer koncentrációjának meghatározása, amely gátolja a mycobacterialis populáció egy jelentős részét. Ha helyesen történik, akkor ez a módszer jó megbízhatósággal bír.

Felállítása előtt a vizsgálat, győződjön meg arról, hogy a kiválasztott kultúra Mycobacterium tuberculosis nincs idegen mikroflórája. A tenyészet mikobaktériumok 0,9% -os nátrium-klorid-oldattal állítjuk elő, homogén szuszpenziót tartalmazó 500 millió mikrobiális szervek 1 ml (optikai turbiditás standard 5 egység). A kapott szuszpenziót hígítjuk 0,9% -os nátrium-klorid-oldattal (1:10), és a Pipettázzunk 0,2 ml szuszpenzió minden cső készlet táptalaj. A beoltott kémcsöveket egy inkubátorban 37 ° C-on, és tartott vízszintes helyzetben 2-3 napig, hogy a lejtős felület a táptalajt egyenletesen inokuláljuk szuszpenzió Mycobacterium tuberculosis. A csöveket ezután függőleges helyzetbe helyezzük és 3-4 hétig inkubáljuk. Az eredményeket 3-4 hét után rögzítjük.

Mivel az időzítés hatóanyag-leadást klinikai anyagból táptalajon alkotják legalább 1-1,5 hónapon szembeni hatóanyag lehet ezzel a módszerrel kapott nem korábbi, mint követően 2-2,5 hónap után szemcseképző anyagra. Ez a módszer egyik fő hátránya.

Értsd meg a mycobacteriumok gyógyszerérzékenységének meghatározásának eredményeit bizonyos kritériumok alapján. A szilárd táptalaj-tekinthető érzékeny a koncentrációja a gyógyszer, amely a közegben, ha a telepek számát a mycobaktériumok termesztett in vitro ez a gyógyszer nem több, mint 20, bőséges növekedés a kontroll csőbe gyógyszerek nélkül. Csak a 20 gyarmatnál jelenlévő kultúrában a kultúra a koncentrációnak ellenálló. A gyakorlatban a növekedés során a vizsgálati csövek közel 20 cfu értéket eredményeznek. a klinikai egységet értesíteni kell arról, hogy az érzékenység vagy az ellenállás ebben az esetben határvonal, mivel néha megmagyarázhatja a klinikai mutatók fuzzy dinamikáját.

Különböző gyógyszerek esetében létrejött egy bizonyos koncentráció, amelynél megfigyelhető a mycobacterial populáció kritikus arányának reprodukálása. Ezeket a koncentrációkat "kritikusnak" nevezzük. A stabilitás kritériumaként a mycobacteriumok populációjának növekedését egy tápközegben kritikus koncentrációjú készítményben alkalmazzuk.

A hazai TB gyakorlatban a gyógyszerrezisztencia meghatározásakor nem korlátozódnak csak kritikus koncentrációk meghatározására. Ez annak köszönhető. hogy a kiterjesztett meghatározása szintje a gyógyszer-rezisztencia lehetővé teszi a klinikus számára, hogy pontosabban pozícionálja a taktikák kemoterápia segítségével ismerete potenciáló hatásának gyógyszer-kombinációk, cikkcakk várhatóan rezisztenciát, vagy alkalmazhatunk a hatékonyabb gyógyszerek csoport használt anti-TB gyógyszerek.

Az abszolút koncentráció-módszer a legegyszerűbb, de a legérzékenyebb a végrehajtás során végrehajtott hibák esetében is. Megbízhatóbb, különösen a második vonalbeli gyógyszerek érzékenységének meghatározása és az Oroszországon kívüli közösség meghatározása az arányok módszerével. Figyelembe veszi az abszolút koncentrációk módszerének hiányosságait, de végrehajtásuknál sokkal fáradságosabb.

A módszer nagyon hasonlít az abszolút koncentrációs módszerhez. A tesztcsövek gyógyszeres készítményekkel történő elkészítése ugyanúgy történik. mint az abszolút koncentráció módszerében. A mycobacterium tuberculosis szuszpenziójának mag adagját azonban 10-szeresére csökkenti. amely kiküszöböli a mycobacterium tuberculosis egyes törzseinek spontán rezisztenciájának gyakoriságát olyan gyógyszerekkel, mint az Etambutol, a protionamid, a capreomycin. Kontrollként 2 vagy 3 csöveket használnak, amelyek magassága egyenlő a kémcsövekben, egymást követően 10 és 100 alkalommal hígították. A stabilitás kritériuma a mycobacterium tuberculosis vizuálisan megfigyelt növekedésének aránya. Az 1. sorozat gyógyszerei esetében a stabilitási kritérium a kezdeti populáció 1% -os növekedésének többletét jelenti a második sorban levő gyógyszerek esetében - a kezdeti érték 1 vagy több mint 10% -ának növekedése a kiválasztott kritikus koncentrációtól függően.

1997-ben egy munkacsoport WHO és a Nemzetközi Szövetség a bevált tuberculosis TB gyógyszer-rezisztencia tett kiigazításokat ezeknek a kritériumoknak, mely tekinthető ellenálló micobaktériumok amelyek nőnek a szilárd tojás média Löwenstein-Jensen a következő koncentrációkban:

  • dihidrosztreptomicin - 4 μg / ml;
  • izoniazid 0,2 μg / ml:
  • rifampicin 40 μg / ml:
  • Az Etambutol 2 μg / ml.

2001-ben kritikus koncentrációkat javasoltak a következő másodlagos gyógyszerek (1% kritikus arányban):

  • kapreomicin - 40 mcg / ml;
  • protionamid - 40 mcg / ml;
  • kanamicin - 30 μg / ml;
  • viomicin - 30 mcg / ml;
  • cikloszerin 40 μg / ml;
  • aminosalicilsav - 0,5 μg / ml;
  • ofloxacin - 2 μg / ml.

A növekedési eredményeket 4 hét elteltével, előzetes és 6 hetes termesztés után értékeljük - mint végső.

A pirazinamidra ható gyógyszerérzékenység meghatározására, amelyet a tuberkulózis modern kemoterápiájában széles körben alkalmaznak, az ajánlott kritikus koncentráció 200 μg / ml. Azonban még mindig nincs általánosan elfogadott módszer a hatóanyagnak a szilárd táptalajon való ellenálló képességének meghatározására, mivel antibakteriális aktivitása csak savas közegben (pH o C;

  • pigmentáció hiánya (elefántcsont);
  • jelzett savas-gyors szín;
  • pozitív niacin teszt;
  • pozitív nitrát reduktáz teszt;
  • a termostabil kataláz (68 ° C) hiánya.
  • A növekedés hiánya egy Levenstein-Jensen táptalajon, amely:
    • 1000 μg / ml nátrium-szalicilát,
    • 500 μg / ml paranitro-benzoesav,
    • 5% nátrium-klorid:
  • növekedést mutat 1-5 μg / ml tiofén-2-karbonsav jelenlétében.
  • Az izolált mikobaktériumok differenciálódásának jelentősége jelentősen megnő a tuberkulózissal vagy mycobacteriosissal összefüggő HIV / AIDS-esetek gyakoriságának növekedésével. Jelenleg nincsen abszolút bizonyosság arra nézve, hogy a gyakorlati regionális laboratóriumok készen álltak erre a munkamennyiség helyes elvégzésére.

    A tuberkulózis immunológiai diagnózisa

    Van egy sor egyetemes jelenség, gyógyszerek és immunológiai vizsgálatok, amelyeket eredetileg fedezte fel a tuberkulózis vagy a modellek az immunválasz mycobacteria. Ezek közé tartozik a BCG Tuberculin, egy ilyen jelenség például kután DTH (tuberkulin - Pirquet és Mantoux reakció), a reakció, hogy a szubkután tuberkulin érzékenyített állatokat (Koch-jelenség). A fertőző betegségek egyik első ellenanyaga is kimutatható a tuberkulózisban. Természetesen a mélyebb megértéséhez jó tuberculosis immunitás mechanizmusok és azok genetikai kontroll, annál nagyobb lehet az immunológiai módszerek és gyógyszerek, amelyek befolyásolják az immunrendszert, gyakorlati problémák megoldására a TB.

    A legfontosabb és legnehezebb gyakorlati probléma jelenleg a tuberkulózis kimutatása a lakosság tömeges szűrésének folyamatában. Azonban a "sikerek" (korlátozott anyag) számos beszámolója ellenére nincs megfelelő immunológiai módszer ("bármely karban" reprodukálható) és egy erre alkalmas gyógyszer.

    Az immunológiai módszereket, különösen a szerológiai vizsgálatokat (antigének, antitestek meghatározása) és a tuberkulin-provokáló teszteket igen széles körben alkalmazzák a klinikai gyakorlatban.

    A differenciáldiagnózisban használt immunológiai vizsgálatok közül elsősorban a szerológiai módszerek - az antigének és antitestek meghatározása a test különböző környezeteiben.

    A mycobaktériumok tuberkulózisa elleni antitestek specificitása függ az immunológiai vizsgálatban alkalmazott antigénektől. Jelentős mennyiségű antigént javasolnak, amelyek közül az első a tuberkulin PPD:

    • PAP és egyéb összetett készítmények a tenyésztőfolyadékból;
    • ultrahangos szétesés;
    • Triton kivonat és egyéb sejtfalak komplex készítményei;
    • 5-antigén (Daniel);
    • 60-antigén (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • kötőfaktor (trehalóz-6,6-di-mikollát);
    • fenolos és más glikolipidek;
    • lipopoliszacharid;
    • fibronektin-kötő antigén;
    • fehérjék (leggyakrabban rekombináns); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 CDA stb.

    Ennek eredményeként több éves kutatás az orosz és külföldi tudósok feltárták az alapvető törvények és hatékonyságát az antitest szerológiai diagnosztizálására tuberkulózis: a bonyolultabb antigénnel, a nagyobb érzékenységet és kisebb sajátossága a teszt. Sajátosságai a különböző országokban függ a lakosság az M. tuberculosis és nontubercular mycobacteria tevékenységükben BCG oltást, és mások. A gyermekek, az információ tartalma szerodiagnosztizálására alacsonyabb, mint a felnőtteknél. Az elsődleges tuberkulózisban (gyakrabban gyermekekben) az IgM meghatározása sokkal informatívabb. másodlagos IgG-vel. A HIV-fertőzött betegeknél az antitestek meghatározásában a szerodiagnosis informatív értéke csökken. Hatékonyság antitestek meghatározására számától függ a „klinikai szempontok”: folyamat aktivitás (a jelenléte vagy hiánya „Isolation” mycobaktériumok jelenléte bomlása üregek, a peritumorális), a gyakorisága a folyamat, az ideje annak áramlását.

    Az enzim immunvizsgálat (ELISA) módszerének érzékenysége körülbelül 70%. A vizsgálat elégtelen hatékonysága alacsony specifikusságának köszönhető. Korábban megvizsgálták a magas kockázatú csoportokban a szerológiai szűrés lehetőségét, különösen a tüdő utáni tuberkulózisban szenvedő személyek körében.

    Hogy fokozza a specificitás ELISA folytatja a keresést több specifikus antigének, ideértve a géntechnológiai úton előállított: ESAT-6 és mások (lásd fent)... Szigorúan specifikus antigének (38 kDa, ESAT) alkalmazása növeli a specifitást. de jelentősen csökkenti az elemzés érzékenységét. Együtt IFA (kísérleti laboratórium vizsgálati rendszerek. Pl Pathozyme ELISA kit) kitekre is oldalsó immunkromatográfiás szűréssel (Mycodot), valamint más hasonló vizsgálatokat (dot-elemzést a membrán) egy vizuális értékelést a vizsgálati eredmény. E vizsgálatok során az elemzést 10-30 percig végezzük; nem igényelnek különleges felszerelést, vizuális értékelést igényelnek az eredményekről, amelyek bizonyos szubjektivitással járnak. Ezek a módszerek hozzávetőleg azonos érzékenység és specificitás jellemzők (70% és 90-93%, sorrendben), mint a hagyományos ELISA.

    Az immunelemzési módszerek használata meghatározó érték, mint kiegészítő, figyelembe véve az alkalmazott módszerek komplexét, a tuberkulózis differenciál diagnózisában, különösen az extrapulmonáris formák diagnózisában. A leghatékonyabb ELISA módszer a tuberkulózis meningitis diagnózisa a cerebrospinális folyadék vizsgálatában. Ebben az esetben az elemzés érzékenysége 80-85%, a specificitás pedig 97-98%. Vannak adatok a tuberkulózis uveitis diagnózisában a mycobacterium tuberculosis antitestek kimutatásának hatékonyságára tear fluidumban.

    A gamma interferon szintézis indukciója in vitro

    A gamma interferon (IFN-γ) egy specifikus immunvédő faktor, melyet makrofág enzimrendszerek aktiválásával valósítanak meg. A szenzitizált T-limfociták IFN-γ szintézisének indukciója kölcsönhatásba hozható a mycobacteriumok antigénjeivel.

    Mint a tuberkulin PPD-ként használt antigének. és a specifikus antigének, előállíthatjuk géntechnológiai módosítást, különösen antigének ESAT-6 (korai szekretált antigén, amelynek a molekulatömege 6 kDa) és CFP-10 (tenyészet szűrlet fehérje 10 kDa). Genetikai vagy rekombináns antigének hiányoznak a BCG vakcina és más mikobaktériumok sejtjeiben. Tuberkulin alkalmazása esetén az IFN-γ indukciós teszt eredményei összehasonlíthatóak a tuberkulózis bőrvizsgálatának eredményeivel (közvetlen korreláció). Genetikailag módosított antigének alkalmazása esetén a vizsgálati eredmények pontosabbak és nem függenek a korábbi BCG vakcinázástól. A tuberkulózisfertőzést nem tapasztalt vakcinázott személyek vizsgálata során a teszt fajlagossága 99%. A vizsgálat érzékenysége a tuberkulózisban szenvedő betegek körében 81-89% között változik.

    Vizsgálatok és diagnosztikai eszközök kerültek kifejlesztésre alapuló rövid távú sejtek tenyésztésére vagy teljes vér mononukleáris sejtek véréből izolált antigénekkel Mycobacterium tuberculosis in vitro ezt követő meghatározása IFN-γ koncentrációját vagy megszámoljuk a T-limfociták, amelyek szintetizálása IFN-γ. A koncentráció az interferon in vitro szintetizált ELISA útján, a monoklonális antitestek kötődését IFN-γ. Ezután, egy kalibráló standard IFN-γ által meghatározott a koncentrációja a kémcsőben vagy kutak a lemez.

    Az Elispot teszt végrehajtásakor az IFN-y szintetizáló T-limociták száma. az IFN-γ antitestekkel bevont lemez felületén számolják.

    fejlesztők Diagnosticum az IFN-γ in vitro indukció, amelyet az ügynökség által jóváhagyott Gyógyszerek és amerikai termékek, azt állítják, hogy a teszt nem lehet különbséget tenni a latens TBC-fertőzés aktív tuberkulózis. Ezért a magas fertőzést mutató területeken a vizsgálat nem közvetlenül diagnosztizál. Hazánkban azonban alkalmazható a tuberkulózis-fertőzés megkülönböztetésére a gyermekeknél a vakcinázás utáni allergiától, valamint a kezelési folyamat specifikus immunitásának felmérésére.

    Jelenleg az in vitro specifikus tuberkulózis antigének indukálásának meghatározására szolgáló hazai tesztrendszert vizsgálják.

    Az immunállapot és a tuberkulózis folyamata, az immunhiányosság

    A tuberkulózis kezelésének folyamata emberekben változások vannak az antigémiában és az immunrendszer állapotában.

    Az elváltozások és a szövetek változásaira vonatkozó adatok nagymértékben ellentmondásosak. Az egyetlen dolog, amit jól meg lehet jegyezni, hogy a tuberkulózis granulomákban, rendszerint jelentős számú aktivált T-limfocitát mutatnak ki.

    Két további rendelkezés megfogalmazására van szükség, amelyek szükségesek ahhoz, hogy megértsük az immunológiai mechanizmusok szerepét az emberben a tuberkulózis kezelésében:

    • Az AIDS-betegek különösen magas a többszörös gyógyszerrezisztencia gyakoriságában;
    • több gyógyszerrezisztenciával (és HIV-fertőzés hiányában) az immunitás zavarai (különösen a T-sejtek kapcsolata) különösen jelentősek.

    Amikor a tuberkulózis széles körben alkalmazzák különböző módszerek immunmoduláció: ez elsősorban ható gyógyszerek elsősorban a T-sejtes immunitás és a rendszer a mononukleáris fagociták (timusz hormonok, izoforon, likopid, polioksidony et al.). valamint az egész (enyhített) mikobaktériumok és azok komponensei.

    A tuberkulózis molekuláris-biológiai diagnózisa

    A molekuláris biológiai eljárások a diagnózis az fertőző betegségek közé tartozik, főleg, módszerek alapján manipulálni a genom anyagának bakteriális és virális patogének azonosítani különleges genetikai anyag - DNS-szegmenseket, amelynek a nukleotidszekvenciája specifikusak egy adott típusú vagy kórokozó törzsek elemezni konkrét DNS-szekvenciák olyan génekben, amelyek meghatározzák a kórokozó érzékenységét bizonyos gyógyászati ​​anyagokhoz, valamint a funkcionális analízishez a kórokozó bizonyos génjeinek aktivitását. Molekuláris biológiai módszerek voltak széles körben a tudományos kutatás és gyakorlati alkalmazása a diagnózis és ellenőrzés a különböző bakteriális és vírusos fertőzések megnyitása után 1985-ben, Carrie Myullisom (Nobel-díjat. 1989) polimeráz-láncreakció.

    A polimeráz láncreakciós módszer elvei és lehetőségei

    A PCR lehetővé teszi, hogy in vitro amplifikálják (szaporodjanak) a nukleotidszekvenciát (a kórokozó DNS-fragmensét) több órán keresztül, több millió alkalommal. Az egyedi DNS-láncok jelenlétében végzett reakció meghatározza a vizsgálat rendkívül nagy érzékenységét.

    A DNS-lánc egyes régióinak nukleotidszekvenciája meghatározza a mikroorganizmus genetikai azonosságát, ami magyarázza a PCR nagyfokú specifitását.

    Ennek értéke a technika kimutatására és vizsgálat a jellemzők Mycobacterium tuberculosis által okozott biológiai jellemzői mikroorganizmust nagyon lassú növekedés: megkettőződési ideje Mycobacterium tuberculosis DNS, amikor a tenyésztést 12-24 órán át.

    A PCR módszer elve az amplifikációból áll - többször, több millió alkalommal. egy adott DNS-szekvencia szekcióinak egy tubus-mikrovolumban való szaporítása a következő három reakciószakasz ciklikus megismétlése során, amelyek mindegyike különböző hőmérsékleti rendszerben halad:

    • I. fázis - a kettős szálú DNS denaturálása melegítéskor, a láncok divergenciájával;
    • II. Szakasz - láncindítók (primer oligonukleotidok) komplementer kötődése (hibridizáció), szigorúan specifikus láncok terminális szakaszaihoz, amelyeket a DNS-fragmens szaporítására választottak;
    • III. Lépés - a DNS-fragmens lánc befejezése egy termostabil DNS-polimeráz segítségével.

    Az in vitro amplifikációhoz a mátrix DNS-molekuláknak kell lenniük. négyféle dezoxinukleozid-trifoszfátok (nukleotid) tartalmazó megfelelő nitrogéntartalmú bázisokkal: adenin (A), timin (T), guanin (G), citozin (C); mesterségesen szintetizált alapozó oligonukleotidok (láncindítók), amelyek 18-20 bázispárból állnak; 68-72 ° C-os hőmérsékleten optimális hőmérsékleten termostabil enzim-DNS-polimeráz és magnéziumionok.

    A PCR specifitása a DNS-fragmens választásától függ. Ennek megfelelően szintetizáló szárnyas oligonukleotidokat állítanak elő. A hibridizáció specifikussága és a DNS-lánc befejezése a következő nitrogénbázisok komplementaritásának elve alapján következik be: adenin-timin, guanin-citozin.

    Ahhoz, hogy meghatározzuk a genomi tuberkulotikus mikobaktériumok komplex leghatékonyabb célpont amplifikációs a legtöbb vizsgálati rendszerek választott DNS-fragmens IS6110, amely a legtöbb törzsben a Mycobacterium tuberculosis-genom jelentős számú (10-20) az ismétlések, amely együtt specificitás, magas a vizsgálat érzékenységét. Ugyanakkor, a Mycobacterium tuberculosis törzsek leírt kis számú ismétlés, vagy nincs IS6110 fragmens.

    A DNS-molekulák izolálása biológiai mintából

    A PCR végrehajtásához a kórokozó DNS-molekuláit minimális térfogatban kell elkülöníteni a biológiai anyagtól, minimális mennyiségű nem-specifikus DNS-t és az enzim-DNS-polimeráz különböző inhibitorait.

    A minták elkészítését olyan körülmények között kell elvégezni, amelyek megakadályozzák a minták keresztszennyeződését az izolált DNS-molekulákkal. Ehhez a klór tartalmú oldatokkal a helyiség ultraibolya, padló és munkalapok előkezelése szükséges. A tiszta kesztyűk, az eldobható kémcsövek és a tippek kötelező automatikus tisztítása az automatikus pipettákhoz.

    Ahhoz, hogy izoláljuk a DNS-t Mycobacterium tuberculosis klinikai mintákból (cerebrospinális folyadék, bronchiális mosás), amely nem tartalmaz nagyszámú sejt, sejttörmelék, vagy ezek sói, elegendő ahhoz, hogy centrifugáljuk a minta 3-4 ezer. Rpm, hozzá az iszap 20-30 ul 2% -os oldat Triton X-100-at és 90 ° C-on 30 percen át melegítjük.

    Előállításához a köpet mintákat kell hatékony cseppfolyósító, amelyet általában egy 4% -os nátrium-hidroxid és az N-acetil-L-cisztein (NALC) mennyiségben 50-80 mg mintánként - attól függően, minta viszkozitása. A NALC oldatot ex tempore kell elkészíteni, vagy a NALC por közvetlenül hozzáadható a mintához. Cseppfolyósodás után a mintákat 15 percen át 3000-4000 fordulat / perc sebességgel centrifugáljuk 50 ml-es injekciós üvegekben, pl. ugyanolyan feltételek mellett, amelyeket a váladék előkészítéséhez ajánlott.

    Az extrakcióhoz való DNS üledéket módszert alkalmazzák leggyakrabban alapján a használata egy 5-6 mólos guanidin-izotiocianát lizáló reagenst, mint a mikroporózus részecskék és a szilícium-oxid ( „diatomaföld”) szorbeáló DNS-molekula. A nem-specifikus anyagok, beleértve inhibitorok lehetséges, mossuk, majd 2,5 mólos guanidinium-izotiocianát és etanolos oldat, amely után a DNS-molekula deszorpciója vízben, és ezeket a mintákat végrehajtásához használt PCR. Az egyszerűség kedvéért a technológia DNS izolálás „diatómaföld” helyett gyakran mágneses mikrorészecskék bevont szilícium-oxid. Ebben az esetben a mikrotömegekhez speciális mágneses állványt használnak centrifugálás helyett a részecske kicsapódása céljából.

    Oroszországban a mycobacteriumok immunmágneses elválasztásának eredeti módszerét fejlesztették ki a kórokozó DNS extrakciójával. A Mycobacterium tuberculosis immunomagnetikus elválasztást ferroparticles mérete 3-5 mikron, bevont szilícium-dioxid, amelyhez kapcsolódnak kémiai kötéssel poliklonális (nyúl) antitestek Mycobacterium tuberculosis. A lúgos lízist követően a köpet utáni mintákat semlegesítjük savas trisz-HCl-oldattal, és immunmágneses szorbenssel inkubáljuk. Ezután az immunoferroszemcséket egy mágneses rúddal gyűjtjük össze, cserélhető csúcsmal, mikrocsövön át, és kicsapjuk. 20-30 μl 2% -os Triton X-100 oldatot adunk hozzá és 30 percig 90 ° C-on melegítjük. A felülúszót DNS-templátként alkalmazzuk PCR-analízishez.

    Nehéz probléma a mycobacterium tuberculosis DNS izolálása biopsziás mintákból. Az enzimbiopszia esetében a proteináz K enzimot 200-500 mg / l végső koncentrációban alkalmazzuk 56 ° C-os hőmérsékleten egy éjszakán át. Továbbá az egyik ismert módszer alkalmazható. A biopsziák PCR-analízisében a nem specifikus DNS-mennyiség gyakran okozza a reakció gátlását, ami szükségessé teszi a DNS ismételt extrakcióját.

    Az eredmények kimutatására szolgáló módszerek

    A reakció befejezése után a kórokozó amplifikált DNS-fragmenseit különböző módszerekkel azonosítjuk.

    A gélelektroforézis módszer jól ismert. A kapott DNS-fragmenst a kívánt specifikus DNS-fragmenst tartalmazó pozitív kontrollal azonosítjuk, vagy egy ismert méretű (a nukleotidpárok száma) fragmens alapján, amelyet standard molekuláris markerként határozunk meg.

    Specifikus festék jelenlétében az etidium-bromid a kétszálú DNS-ben található. a szintetizált DNS-fragmenst az ultraibolya hatása alatt sávban fényként érzékeljük.

    A DNS-fragmens méretét, amelyet az elektroforézissel kell meghatározni a kezdetektől, meg kell felelnie egy ismert molekulatömeg-markernek vagy pozitív kontrollnak.

    Egyéb eljárások annak meghatározására PCR eredmények alapján a hibridizációs egy egyláncú PCR termékeket egy oligonukleotiddal azokkal komplementer - DNS-próba biotinnal jelöljük, majd kimutatási enzimatikus reakciók, például kötődés sztreptavidin-biotin alkalikus foszfatáz.

    Az ilyen típusú kimutatás alapján olyan PCR-elemzőket hoztak létre, amelyekben a PCR-eredmények kimutatását automatikusan végrehajtják az enzimreakció megnyilvánulása után a minták optikai sűrűségének olvasásakor.

    E módszerek hátrányai a DNS-molekulák meglehetősen rövid darabjainak intralaboratorikus szennyeződésének lehetőségei. Amikor a molekulák új mintákat adnak be, PCR-be mátrixszá válnak és hamis pozitív eredményhez vezetnek.

    E tekintetben a hamis pozitív eredmények elkerülése érdekében szigorú szabályokat kell bevezetni a telepek elválasztására és elszigetelésére: a DNS DNS-ből való kinyerése biológiai mintákból; helyek az eredmények kimutatásához (elektroforézis) a tiszta zónából. Ezek a helyiségek a valószínű szennyeződés zónája. Egy másik elszigetelt terület tiszta hely a kémcsövekben vizsgálandó DNS-minták PCR-reakciókeverékkel történő bevitelére. Végül azt feltételezzük, hogy a fő eszközt - a DNS-erősítőt - külön, esetleg irodahelyiségben kell elhelyezni.

    A szennyeződés elkerülése a termékek az előző reakciók - néhány Likon-Amp PCR System teszt helyett dezoksinukleozidtimidina tartalmaznak dezoksinukleoziduridin amely, amikor in vitro szintézissel áramkör beépített helyett a megfelelő helyzetben, azaz A natív DNS-ben lévő timbin nitrogénbázisát uracil helyettesíti. Uracil DNS glycosylase adunk a reakcióelegyhez, hogy az analit, elpusztítja csak szennyező töredékek deoxiuridinné bontja, de nem a DNS natív analizáltuk.. A következő 94 ° C-os melegítés inaktiválja ezt az enzimet, és nem zavarja a PCR-ben történő amplifikációt.

    Az rRNS izotermikus amplifikációján alapuló tesztrendszert alkalmazunk, amelyre először a DNS-molekulák fordított transzkripcióját és szintézisét végezzük. amely viszont egy mátrix az RNS-molekulák következő szintéziséhez. Az RNS-amplikont kimutatjuk egy akridin-festéses DNS-próbával, ha egy reakciócsőoldatban hibridizáljuk. Ez a módszer, a nagy érzékenység mellett, előnyös egy csőben történő elemzéssel, amely megakadályozza a szennyeződést. A szerzők szerint ennek a módszernek a légzőminta érzékenysége 90% -kal, 99-100% -os specificitással rendelkezik.

    Új detektálási módszerek valós idejű PCR-ben valósulnak meg. Ezek a módszerek elsősorban a PCR-ben különböznek egymástól, és az eredmények kimutatását egy zárt csőben egyidejűleg hajtják végre. Ez nemcsak technológiai szempontból egyszerűsíti az analízis technikáját, hanem megakadályozza a laboratóriumi helyiségek és vizsgálati minták szennyeződését a korábbi PCR-termékekkel.

    A real-time PCR kimutatása eredmények a fluoreszcencia során fellépő fluorogén hibridizációs próba DNS amplifitsi Rui-PCR során egy adott DNS-fragmenst. Szerkezet fluorogén DNS-próbák megépíteni, hogy a fluoreszcens marker szabadul fel, amely az enzimatikus reakció vagy távolságot a kioltó molekula fluoreszcencia csak a specifikus hibridizáció a kívánt DNS-molekulát az amplifikálni a PCR. Mivel a száma próbamolekulák hibridizált a fluoreszcencia növekedését arányos az érzékelt szint az molekulák száma az amplifikált termék. Mivel minden egyes ciklusban számú PCR-fragmens DNS-molekula megszorozzuk a fele, a ciklus számot, amelynél fluoreszcens meghatározzuk, és növeli fordítottan arányos a száma DNS-molekulák a kiindulási minta. Ha a reakció az, hogy bevezesse a kalibrátor több különböző, ismert koncentrációjú molekulák megfelelő DNS-fragmentumot a Mycobacterium tuberculosis, a számítógépes program használatának lehet számítani, és az összeget a genomiális DNS-t a vizsgálati anyagot.

    Minden standard minta duplikált. A mennyiségi kritérium a meghatározott fluoreszcencia kialakulásához és növekedéséhez szükséges PCR ciklusok minimális száma. Az abszcisszán - a ciklusok száma; az ordinát a fluoreszcenciaérték. A DNS koncentrációja fordítottan arányos a fluoreszcencia megjelenéséhez szükséges ciklusok számával. A jobb oldali oszlopban (21-32) a megfelelő koncentrációk ciklikus számát jelöljük. A DNS-fragmensek 10-szeres koncentrációja közötti különbség 10 2 -10 6 ml - 3,2-3,4 ciklus. Két betegnél az IS6110-fragmensek koncentrációja körülbelül 10 3 / ml és 10 4 / ml volt. Figyelembe véve a Mycobacterium tuberculosis genomjában elemzett fragmensek ismétléseinek (6-20) számát, a mikobaktériumok száma a klinikai mintákban körülbelül 100 és 1000 sejt.

    A PCR alkalmazása a tuberkulózis diagnózisában

    A PCR módszert leginkább a tuberkulózis gyorsított diagnózisára használják - mycobacterium tuberculosis kimutatása klinikai mintákban: köpet. hólyagos kipirulás, pleurális elváltozás, vizelet, cerebrospinális folyadék, oszteolízis punctate, női nemi szervek aspirátumai és különböző biopsziás minták. Abban a vizsgálatban, a Hollandiában körülbelül 500 köpet és bronchiális mosás mintákból származó 340 betegnél igazolt diagnózisa pulmonális tuberculosis vizsgáltuk összehasonlítani a PCR módszerek, mikroszkópia és a kultúra vizsgálatokban keneteket. Az elemzés érzékenysége 92,6,88,9, illetve 52,4% volt. Az összes módszer specifitása körülbelül 99% volt.

    Összehasonlítása hatékonyságának kimutatására Mycobacterium tuberculosis kenet mikroszkópos módszerek, vetés on Lowenstein-Jensen táptalajra, vizsgálati rendszerek VASTES és PCR-analízissel. A PCR 74,4% -os érzékenységet mutatott, mikroszkópiai - 33,8%, sűrű táptalajon - 48,9% és VASTES - 55,8%. A Levenstein-Jensen táptalajon végzett vetés átlagos kimutatási ideje 24 nap. VASTES - 13 nap, PCR - 1 nap.

    Megbeszélik a PCR alkalmazását mint érzékeny és gyors módszert a tuberkulózis-kezelés hatékonyságának ellenőrzésére.

    Kimutatása Mycobacterium tuberculosis DNS PCR hatékony kemoterápiás meghatározva hosszabb ideig - átlagosan 1,7 hónap, szemben a kenet meghatározott fluoreszcens mikroszkópia, és 2,5 hónap, szemben a bakteriológiai vizsgálat.

    A tuberkulózis extrapolmonáris formáinak diagnosztizálása

    Értéke, mint egy érzékeny PCR eljárás különösen nagy a tüdőn kívüli formák, mivel ez képezi alapján ezek a klinikai és radiográfiás módszerek szokásos bakteriológiai módszerek a Mycobacterium tuberculosis diagnosztikai anyagok hatástalanok.

    A vizsgálat a vizelet minták PCR eredménye pozitív 16 17 betegeknél, akiknél aktív TBC és negatív vizelet 4 betegnél inaktív vese tuberkulózis és 39 beteg húgyúti rendszer betegség nontubercular.

    A csontvelő-aspirátumok vizsgálata során az ismeretlen eredetű lázban szenvedő betegek PCR-analízisének hatékonysága gyanított tuberkulózis esetén bizonyítást nyert. A tuberkulózis nyirokcsomó-gyulladás diagnózisához gyermekeknél 102 szúnyog aspirátumot és 67 gyermeket ért gyomorfekélyű lymphadenitis biopsziás mintáját vizsgálták. Pozitív eredményeket kaptunk: 71,6% valós idejű PCR. fluoreszcens mikroszkópia - 46,3%. kultúra kutatás - 41,8%. A "macskaregés" betegségben szenvedő betegek 50 nyirokcsomó-biopszia vizsgálatában minden eredmény negatív volt. Így a PCR-analízis 100% -os specifikusságát bizonyították. Ugyanabban a munkában, a nyirokcsomók punctura biopsziájával bizonyították az M. avium kimutatásának lehetőségét.

    Diagnózis a tuberkulózis női nemi szervek meddőség, mint ismeretes, az egyik legnehezebb diagnosztikai problémákat. Amikor vizsgáljuk PCR-biopsziák az endometrium, endometrium aspirátumok folyékony minták Douglas tér 14 (56%) 25-vizsgált betegek laparoszkópos gyanúja tuberculosis, pozitív eredményeket kaptunk. Kenet mikroszkóppal és tenyésztéssel 1, illetve 2 eredményt kaptunk. Ezek az esetek PCR-pozitívak is voltak. A legtöbb PCR-pozitív eredményt a szövettani vizsgálat szerint a tuberkulózis jellegzetes tüneteivel kapcsolatos esetekhez kapcsolták; kisebb szám - gyanúja a tuberkulózisnak a laparoszkópiai adatok alapján. Csak egy pozitív PCR eredményt kaptunk az adatok hiányában a laparoszkópos tuberkulózis.

    A tuberkulózis extrapolmonáris formáinak diagnosztizálása során a klinikusok gyakran kérdőjelezik a kórokozó kimutatásának lehetőségét a vérminták PCR-módszerrel végzett vizsgálatakor. Az irodalmi adatok azt mutatják, hogy a mycobacterium tuberculosis DNS-ből való kimutatása a vérmintákból a HIV-fertőzés messzemenő formáival lehetséges. A mycobacterium tuberculosis DNS-jét csak az átültetett vese- és immunszuppresszióban szenvedő betegek különböző szervek tuberkulózisában mutatták ki.

    A mycobacteriumok fajai azonosítása

    A PCR-eljárással lehet elég hatékony gyors azonosítását mycobaktériumok tuberkulózis komplex és néhány faj a mycobaktériumok nontubercular, miután megkapta a kezdeti növekedést. Ebben az esetben a PCR alkalmazásával lehet menteni 7-10 nap szükséges a további tenyésztés pozitív azonosítás. Kutatási PCR technikailag nagyon egyszerű, mivel nem igényel bonyolult minta előkészítése klinikai anyagból elérni a magas érzékenység. A tanulmányban 80 pozitív ebben a vizsgálati rendszerben (MB Vasto. Organon cég) minden pozitív tenyészetek PCR szigorúan specifikus és tartott 1 napig. Azonosításához más fajok mycobaktériumok a DNS előállítása a kórokozó tenyészet hibridizáljuk specifikus DNS jelölt próbák akridin és törzsek által észlelt megjelenése kemilumineszcenciával chemiluminometer vagy nitrocellulóz csíkokat vizuális értékelést a hibridizáció után. Egy ilyen kit azonosított korlátozott számú fajok: Mycobacterium tuberculosis komplex. M. avium, M. avium komplex, M. kansasii és M. gordonae.

    A.Telenti és mtsai. is kifejlesztett egy viszonylag egyszerű és olcsó eljárást fajok azonosítása klinikailag fontos mikobaktérium fajok esetén PCR-rel és az azt követő kezelés két restrikciós enzimmel (enzimekkel tulajdonságokkal rendelkező vágott egy DNS-molekula specifikus pont). A DNS-fragmenst amplifikáljuk. kódoló hősokk-fehérje (65 kDa), majd kezeljük a kapott PCR-DNS-fragmenst 439 nukleotid-pár külön két enzim - BstEII és Hae III. Ezután elemezzük agaróz gélelektroforézissel kapott két termék, meghatározása a méretük (bázispárok számát) alkalmazásával egy szabványos DNS-fragmentumok (molekuláris DNS-markerek) hosszúságú 100-1000 bázispár. Az egyes specifikus típusú (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, fortuitum) kimutatására két vagy három DNS-fragmens a különböző méretű az egyes restrikciós enzimmel. A kapott különböző DNS-méretek kombinációja lehetővé teszi ezeknek a fajoknak a megkülönböztetését maguk között.

    A biológiai DNS-rétegek technológiáját fejlesztik. amely egy tanulmányban több mint 100 fajta mycobacteriumot képes azonosítani.

    A fajok meghatározása is elvégezhető PCR-amplifikációjával 16S rRNS variábilis régió, majd szekvenciálás amplikonok, összehasonlítva a megfelelő primer struktúra, amely lehetővé teszi azonosítását a több mint 40 mikobaktérium fajok esetén.

    A PCR segítségével a mycobacterium tuberculosis komplexen belüli faj-azonosítás is elvégezhető, beleértve az M. bovis és az M. bovis BCG differenciálódását. Ehhez elemezzük az RD1 genomiális régióiban lévő egyes gének jelenlétét vagy hiányát. RD9 és RD10. Az RD1 nincs jelen a M. bovis BCG-ben, de jelen van virulens fajokban, köztük M. bovis-ban.

    A Mycobacterium tuberculosis PCR-vel történő gyógyszerérzékenységének meghatározása

    Célkitűzések A molekuláris genetikai módszerek A hatóanyag érzékenységi vagy rezisztenciáját Mycobacterium tuberculosis csökkenti azonosítani mutációk specifikus nukleotidszekvenciákat ismert gének. Alapvető módszerek alapulnak akár direkt prochityvanii (szekvenálás) ezen szekvenciák az amplifikálás után, vagy hibridizációs biotin-jelzett amplifikált DNS-fragmenseket a PCR DNS-próbák. Mindkét alternatíva magukban azonosítására a nukleotid szubsztitúciók, a szekvenciák, amelyek segítségével DNS-próbák vezet hiányában vagy hiányos hibridizáció nitrocellulóz membránra enzim konjugátumot (sztreptavidin-alkalikus foszfatáz) - Módszer LIPA-Rif-TB.

    Eljárás a fluoreszcencia egy lokálisan rögzített microsections komplementer DNS-próbákat ismert mutációk a PCR-rel amplifikált gén felelős régiók rezisztencia vagy a hatóanyag-érzékenység, úgynevezett mikrobiochipov módszerrel. Ennek a kutatásnak a fő algoritmusa a következő. Miután DNS-t izolálunk egy klinikai minta, vagy a kultúra a mycobaktériumok szükséges, hogy végezzen PCR-amplifikálása releváns fragmenseinek rpoB gén felelős a hatóanyag érzékenységét a rifampicin vagy katG és Inha proteineket kódoló géneket Mycobacterium felelősek érzékenység isoniazid. PCR eredményeket értékeltük agaróz gélelektroforézissel, amelyben megerősítik kézhezvételét megfelelő DNS-fragmenseket a kívánt hosszúságú. Ezt követően egy második forduló PCR-t hajtunk végre, hogy fluoreszkáló címkét juttassunk be a DNS-be. A PCR eredményeit ismételten gélelektroforézissel igazoltuk. Ezt követően, hibridizációt végeztünk (éjszakán át tartó inkubálás), majd mossuk a kapott anyagot a biochip, amely nagy számú rögzített egy kis üveglap rövid DNS-szálak (próbák), amelyek komplementerek nukieotidszekvenciát a hatóanyag-érzékeny típusú Mycobacterium tuberculosis a pontokon a lehetséges mutációk. valamint a gyógyszerrezisztenciaért felelős mutáns szekvenciákhoz. Hely DNS-próbák a tányéron - szigorúan meghatározott, és a szint a megfigyelt fluoreszcencia való hibridizációt követően meghatározza az eredmény egy speciális olvasó berendezés van telepítve. E tekintetben az elemzés eredményeit egy speciális számítógépes program segítségével határozzák meg.

    Az elmúlt években fejlesztettek alternatív módszereket a mycobacterium tuberculosis gyógyszerérzékenységének meghatározására valós idejű PCR-technika alapján, amely lehetővé teszi e vizsgálatok lezárt csöves vizsgálatának elvégzését.

    Az 1. ábrán. A 13-13. Ábra bemutatja a mycobacterium tuberculosis klinikai tenyészetének elemzésének eredményét a rifampicinnel szembeni rezisztencia valós idejű PCR-vel történő meghatározása során: 218 - rifampicinre érzékeny kontrollminta; 93 - a Ser-Trp TCG-TGG mutációjának pozitív kontrollja; 4482 - pozitív kontroll Ser-Leu TCG-TTG mutációjára; 162-322 - kísérleti minták. Az amplifikáció kinetikai görbéinek kiszámítása 4 csatornán: 1. csatorna: 393 - pozitív kontroll a Ser-Trp TCG-TGG mutációjára; 2. csatorna: 4482 - pozitív kontroll Ser-Leu TCG-TTG mutációjára; 162, 163, 172, 295 - kísérleti minták; 4. csatorna: a kísérletben részt vevő összes minta amplifikációjának kinetikai görbéi. Az amplifikációs reakció pozitív kontrollja. Következtetések: Az elemzés eredményei alapján azonosították a rifampicin rezisztenciát meghatározó következő mutációkat: a 162,163,172,295-Ser-Leu TCG-TTG mintákban. Ugyanezt az elvet alkalmaztuk a katG és inhA gének által az isoniazidra kifejtett rezisztencia meghatározására, amely meghatározza a leggyakoribb mutációkat.

    A mycobacterium tuberculosis törzs azonosítása

    A legalaposabban tanulmányozott azonosítási eljárása a törzsek Mycobacterium tuberculosis egy technika az úgynevezett restrikciós fragmens hossz polimorfizmus (RFLP RFLP,., Vagy az angol változat), és amely alapul fragmentirovanin (korlátozás) Mycobacterium tuberculosis DNS-enzim PvuII és a kapott fragmensek ezt követő hibridizáció bizonyos specifikus szekvenciákat DNS- az IS6110 ismételt eleme. Fajon belüli változékonyság valósul különböző számú ismétlések IS6110 és helyükre a DNS-t. valamint a különböző távolságok között bizonyos támadási pontokat restrikciós enzim (restrikciós helyek) és az elem IS6110. Ez a technológia nagyon bonyolult és időigényes. Kezelés után kivont DNS-t egy kultúra Mycobacterium tuberculosis, gélelektroforézist végzünk egy restrikciós enzimmel, majd át DNS-fragmenseket különböző hosszúságú egy nitrocellulóz membránra, hibridizációt végeztünk fragmensekkel IS6110-elem és detektálható enzimatikus reakciókat. Az így kapott minta specifikus DNS sávok jellemzi a törzs a Mycobacterium tuberculosis. A számítógépes elemzés segítségével feltárják a törzsek azonosságát vagy rokonságát. Annak ellenére, hogy az RFLP módszer a legkülönbözőbb, azaz azonosítja a legnagyobb különbségek száma a vizsgált törzsek, hatástalan egy kis számú (kevesebb, mint 5) IS6110-ismétlődések megfigyelt egyes törzsek. Az 1. ábrán. A 13-14. Ábra bemutatja a törzsek RFLP-tipizálását.

    Alternatív lehet a térbeli DNS-szekvenciák polimorfizmusának spoligotipizálásának analízise - a DR régió közvetlen ismétlődése közötti köztes. A törzsek spoligotipizálása során a PCR-t a DR területet határoló primerekkei hajtják végre, majd különböző hosszúságú töredékek képződnek, amelyek hibridizálnak a DNS változó közegrészeivel. A DR régió távtartó szekvenciáinak elemzését ismertetjük. a kutatók szerint sokkal egyszerűbb, produktívabb és alkalmas a törzsek elsődleges szűrésére és az előzetes járványtani elemzésre, valamint a közvetlen klinikai anyagokra.

    Nyilvánvaló, hatékonyabb és technológiailag lehetséges módszer egy VNTR (rövidítése az angol szó), vagy a meghatározására szolgáló eljárás a változó számú tandem ismétlődések pontos DNS Mycobacterium tuberculosis. Ez a módszer csak a PCR használatán alapul, és nem igényel további manipulációt. Mivel különbözõ törzsek és különbözõ lokuszok tandem ismétlõdései különböznek egymástól, a különbözõ méretû fragmenseket meghatározzák és elemzik a PCR-termékek keletkezõ elektroforézisében. A kutatók szerint a VNTR alkalmazásával a törzsek nagyobb megkülönböztetése érhető el, mint az RFLP módszerrel.

    Az elmúlt években nagy figyelmet fordítottak a W-Beijing család (a pekingi törzs) Mycobacterium tuberculosis törzseinek eloszlására, amelyek nagyrészt gyógyszerrezisztensek.

    Alapvető követelmények a molekuláris biológiai kutatás minőségére

    A PCR alapvető szabályozási dokumentuma

    Megrendelések az orosz Egészségügyi Minisztérium: №45 származó 2000/07/02 g.. szám 109 g 2003/03/21.. szám a 64 2000/02/21 Az iránymutatás: 1.3.1888-04 „munkaszervezési vizsgálatok PCR anyag fertőzött kórokozó biológiai a patogenitás III-IV. csoportjának hatóanyagai "; 1.3.1794-03 "Az I-II. Patogenitású csoportok mikroorganizmusával fertőzött PCR anyag vizsgálata". 2003.; 3.5.5.1034-01 „Dekontaminálás az anyag, a fertőzött baktériumokat I-IV patogenitási csoportok Amikor PCR,” 2001 11. függeléke egységes utasításokat mikrobiológiai vizsgálati módszerek azonosítása, diagnózis és a kezelés a tuberkulózis.

    A személyzet

    Végrehajtása molekuláris biológiai kutatások tarthat az orvosok a klinikai laboratóriumi diagnosztika, az orvosok bakteriológus, virológusokat, orvosok, biológusok, klinikai diagnosztikai laboratórium, valamint a szakemberek középfokú egészségügyi oktatás, telt specializáció és magas szintű képzés az előírt módon.

    Laboratóriumi helyiségek elrendezése

    A következő laboratóriumi helyiségek szükségesek:

    • A mintakezelési terület olyan laboratórium, amely a III-IV. Patogenitási csoport fertőző ágenseivel foglalkozik a 13.1888-04. Módszertani utasítás szerint.
    • Zóna a reakcióelegyek előállításához PCR - laboratóriumi terem, amely védelmet nyújt a belső laboratóriumi szennyeződéstől - "tiszta" zónától.
    • • Ha elektroforézist vagy hibridizációt alkalmaznak a PCR termékek elemzéséhez. laboratóriumi helyiség, amelyben a megszorzott DNS-fragmenseket kivont csövek és amplifikáció, sorrendben, hogy a környezetbe, a követelményeknek megfelelően a PCR laboratóriumok (1.3.1794-03 iránymutatás Orientációs 1.3.1888-04) teljes mértékben meg kell elkülönül az előző bekezdésekben feltüntetett helyektől. Meg kell zárni a mozgás zóna zónaelektroforézis minta kezelése és a „tiszta” területén a teljes személyzet, felszerelések, olyan anyagok és tárgyak, valamint az átadása levegőt a szellőztető rendszer, illetve ennek eredményeként a huzat. Ez a zóna nem szükséges a PCR-termékek fluorimetriás kimutatásához.
    • A dokumentáció és az eredmények feldolgozásának helyszíne számítógépek és szükséges irodai berendezések. Ez a hely olyan berendezéseket tartalmazhat, amelyek a csövek kinyitása nélkül érzékelik a PCR-termékeket. - fluoreszkáló PCR detektorok és hőciklusok valós idejű PCR-hez.

    A sputum elsődleges kezelésére vonatkozó egészségügyi és epidemiológiai követelmények hasonlóak a mikobaktériumok tuberkulózisához való szokásos mikrobiológiai követelményekhez.

    PCR diagnosztikai laboratóriumi berendezések befejezése

    A laboratórium felszereléseket tartalmaz a következő helyiségekben.

    • A mintaelőkészítés helyiségei a következő felszerelést tartalmazzák: II. osztályú "SP-1.2" védőfólia: "Eppendorf" típusú tesztcsövek fűtő burkolatával ellátott szilárd állapotú termosztát; mikrocentrifuga 13 000 fordulat / perc sebességgel; centrifuga (Vortex); hűtőszekrény -20 ° C-tól +10 ° C-ig terjedő hőmérséklet-tartomány; a "Rroline" sorozat változó térfogatú pipere; OM-1 csapdákkal ellátott szivattyú; pipetta állvány; állvány munkaállomás 200x0,5 ml; állvány munkaállomás 50x1,5 ml; A tesztcsövek 80x1,5 ml-es tárolására szolgáló állványok;
    • Reakciókészítő előkészítő helyiség: Védőkamra PCR-doboz ("Laminar-C 110 cm"); centrifuga - Vortex; A Proline sorozat változó térfogatú pipettái; pipetta állvány; állvány munkaállomás 200x0,2 ml; A tesztcsövek 80x1,5 ml-es tárolására szolgáló állványok; hűtőszekrény -20 ° C-tól + 10 ° C-ig terjedő hőmérséklet-tartomány;
    • helyiség elektroforézishez: kamera vízszintes elektroforézishez; tápegység; átvilágító;
    • DNS-erősítő vagy nukleinsav elemző (PCR valós időben) számítógép és szoftver; elhelyezhető bármilyen tartalék helyiségben. Ha valós idejű PCR technológiát használ. nincs szükség elektroforézisre.

    Külső minőségellenőrzés

    Az objektíve megbízható eredmények megszerzése érdekében a laboratóriumoknak részt kell venniük a laboratóriumi kutatás minőségének külső értékelésében.

    A minőségirányítási rendszerben résztvevők; 12 ampulla fagyasztva szárított baktérium sejt szuszpenziókat, melyek közül kettő tartalmazzák az E. coli E. Coir, 3 flakon Mycobacterium tuberculosis (avirulens törzs) 10 2 / ml; 3 ampulla hasonló törzs sejtjeivel 10 4 / ml koncentrációban; 2 ampulla a nem tuberkulózis mycobacteriummal M. avium-intracellulare és M. kansasii 10 5 / ml koncentrációban.

    A külsõ minõségértékeléssel kapcsolatos elosztott teszteket két független laboratóriumban tesztelték, amelyek széleskörû tapasztalattal rendelkeznek ezen a területen.